[發明專利]一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒

在審

• 申請號: 202011124075.2
• 申請日: 2020-10-20
• 公開（公告）號: CN112251821A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 曾志鵬;張鵬;邢寬;謝珍;何志健;何貴倫;安雪茹
• 申請（專利權）人: 南京實踐醫學檢驗有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06;C12Q1/6806
• 代理公司: 南京瑞華騰知識產權代理事務所(普通合伙) 32368
• 代理人: 錢麗

1.一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：包括R1、R2和R3；

所述R1包括DNA片段化末端修復加尾緩沖液、DNA片段化酶和末端修復加尾酶；

所述R2包括連接緩沖液、連接酶和接頭；

所述R3包括擴增酶、USER酶、通用引物和index引物。

2.根據權利要求1所述的一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：所述DNA片段化末端修復加尾緩沖液包括10-50mM Tris-HCl、10-50mM MgCl₂、1-10mM DTT、20-100μM dNTP、0.2-1.0mM dATP、20-80mM NaCl、0.1-1mg/ml BSA、體積比0.1％-0.5％TritonX-100，體積比0.1％-1％Enhance。

3.根據權利要求1所述的一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：所述Enhance為Twen20、NP40其中的一種或兩種的組合。

4.根據權利要求1所述的一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：所述DNA片段化酶為非特異性核酸酶和T7 Endonuclease I，其中非特異性核酸酶為Vvn核酸酶。

5.根據權利要求1所述的一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：所述末端修復加尾酶為T4多聚核苷酸激酶、T4 DNA聚合酶、Taq DNA聚合酶、Klenow酶幾種的組合。

6.根據權利要求1所述的一種快速高效的構建二代測序文庫的試劑盒，其特征在于：所述接頭為U字形接頭，且接頭的序列如SEQ ID NO.1所示：SEQ ID NO.1：5′-GATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCUACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3′；

其中，第一位G堿基進行磷酸化修飾，3′端最后兩個核苷酸之間的連接鍵進行硫代磷酸化修飾，U堿基為dUTP。