[發(fā)明專利]同時檢測單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的試劑盒及方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011120081.0
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112195276B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 古柏燕;彭忠
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江安維珞診斷技術(shù)有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京知元同創(chuàng)知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11535
• 代理人: 彭勁松

本發(fā)明公開了同時檢測單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的試劑盒及方法。本發(fā)明應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)，采用單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒、JC病毒和EB病毒高度特異的引物和探針，通過一個PCR反應(yīng)即可判定待測樣本中是否存在這4種病毒，比單重?zé)晒舛縋CR方法更便捷迅速、節(jié)約成本。利用本發(fā)明試劑盒對4種病毒的檢測靈敏度均達到10copies/mL，其特異性很好，不和其他病毒發(fā)生交叉反應(yīng)；同時，本發(fā)明試劑盒的擴增重復(fù)性好，精密度均≤2％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于病毒檢測試劑盒技術(shù)領(lǐng)域，涉及實時熒光PCR檢測試劑盒，特別是涉及一種同時檢測單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的試劑盒及其檢測方法。

背景技術(shù)

單純皰疹病毒(herpes simplex virus，HSV)可分為I型和II型(HSV-I和HSV-II)。人是HSV唯一的自然宿主。I型單純皰疹病主要是通過呼吸道、皮膚和粘膜密切接觸傳播，感染腰以上部位的皮膚粘膜和器官，如引起口唇粘膜、鼻前庭、眼結(jié)膜、咽喉部的炎癥及皰疹。口和口周圍發(fā)生的皰疹，99％是由I型皰疹病毒感染引起的。臨床上又可分為原發(fā)型和復(fù)發(fā)型單純皰疹。常見者如皮膚皰疹、皰疹性齒齦口腔炎、眼皰疹(急性結(jié)膜角膜炎、角膜潰瘍)、濕疹樣皰疹、皰疹性甲溝炎，重者可發(fā)展為全身性單純皰疹、皰疹性直腸炎、急性腦炎、急性腦膜炎和神經(jīng)根炎等。HSV-II型主要引起生殖器及腰以下皮膚皰疹。如果孕婦罹患原發(fā)性皰疹病毒感染，病毒就有可能在病毒血癥期間通過胎盤感染胎兒而形成先天性感染。如果孕婦產(chǎn)道感染皰疹病毒(原發(fā)或復(fù)發(fā)感染)，則病毒可于分娩過程中感染新生兒而引起新生兒感染。無論是先天性感染或新生兒感染，預(yù)后都較差。原發(fā)感染后4～5天體內(nèi)產(chǎn)生中和性抗體，但不能防止復(fù)發(fā)。原發(fā)病人可有發(fā)熱，體溫可高達39℃，病程7～9日；皰疹繼發(fā)細菌感染則呈膿皰樣或濕疹樣，病程延長且愈后皮膚留瘢痕。復(fù)發(fā)性單純皰疹，可有細胞免疫缺陷。

卡波氏肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)，是一種雙鏈DNA病毒，KSHV是卡波氏肉瘤的病原體，卡波氏肉瘤是一種損壞外形并潛在致命的出血性肉瘤形式，其特征在于在皮膚上以深色斑或小結(jié)出現(xiàn)的多發(fā)性脈管腫瘤。在組織學(xué)水平上，其特征在于相對一致的紡錘形細胞的增殖，形成束和脈管裂縫。在炎癥浸潤中經(jīng)常出現(xiàn)漿細胞，T細胞和單核細胞，胃腸損害處或相關(guān)的淋巴瘤處出血的最終結(jié)果可能是死亡。

JC病毒(JC virus，JCV)屬乳多空病毒科多瘤病毒種人類多瘤病毒分支。1971年P(guān)agett等首次從進行性多灶性白質(zhì)腦病(progressivemultifocal leucoencephalopathy，PML)患者腦組織中分離出JC病毒。JC病毒在人群中廣泛存在，主要潛伏在人的腎臟等組織內(nèi)。JC病毒的感染發(fā)生在人的童年時期，呈持續(xù)亞臨床潛伏感染狀態(tài)，免疫健全狀態(tài)下可終生無癥狀，屬于無癥狀感染，但對于AIDS患者或服用免疫抑制藥物的患者則可引發(fā)PML等系列疾病，PML是一種致死性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病。近年來研究表明，JC病毒與多種人類腫瘤的發(fā)生相關(guān)，包括腦腫瘤、結(jié)直腸癌、胃癌、食道癌及B細胞淋巴系統(tǒng)腫瘤等。隨著我國HIV/AIDS患者人數(shù)的逐年增加，JC病毒感染作為HIV/AIDS相關(guān)的機會感染也會逐年增多，以及腎移植等器官移植患者在施用免疫抑制藥物后，JC病毒感染引發(fā)PML的概率增大，JC病毒所帶來的危害也會更加突出。對JC病毒感染的檢測包括檢測血清中特異性的VP1抗體，對感染者的尿液、腦脊液、血液及病變組織進行JC病毒DNA檢測，對活組織進行原位雜交及免疫組化檢測等。由于JC病毒在人群中感染率很高，抗體檢測并不能準(zhǔn)確證明樣品是否被活動性JC病毒感染。

EB病毒是皰疹病毒科病毒γ亞科中唯一能夠引起人類感染的淋巴濾泡病毒，具有嗜B淋巴細胞的特性，能夠在B淋巴細胞中建立起隱性感染，刺激細胞的增生與轉(zhuǎn)化。可能與包括傳染性單核細胞增多癥、伯基特淋巴瘤、Burkits肉瘤、霍金奇病和鼻咽癌等在內(nèi)的多種疾病有關(guān)。其中，80％的鼻咽癌病例發(fā)生在中國，在我國南方數(shù)省鼻咽癌的發(fā)病率和死亡率均占惡性腫瘤的第一位。EB病毒感染細胞后的裂解復(fù)制期產(chǎn)生殼抗原(VCA)IgA抗體，其在鼻咽癌中的陽性率達93％，具有極高的特異性。