[發明專利]同時檢測單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的試劑盒及方法

有效

• 申請號: 202011120081.0
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112195276B
• 公開（公告）日: 2022-10-04
• 發明（設計）人: 古柏燕;彭忠
• 申請（專利權）人: 浙江安維珞診斷技術有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 北京知元同創知識產權代理事務所(普通合伙) 11535
• 代理人: 彭勁松

1.一種針對單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的四重熒光PCR檢測用引物及探針，其特征在于，探針序列的5’端標記有熒光報告基團，3’端標記有熒光淬滅基團，具體序列如下：

單純皰疹病毒：

單純皰疹病毒上游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，

單純皰疹病毒下游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，

單純皰疹病毒探針：核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，

卡波氏肉瘤相關皰疹病毒：

卡波氏肉瘤相關皰疹病毒上游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，

卡波氏肉瘤相關皰疹病毒下游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，

卡波氏肉瘤相關皰疹病毒探針：核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示，

JC病毒：

JC病毒上游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:7所示，

JC病毒下游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:8所示，

JC病毒探針：核苷酸序列如SEQ ID NO:9所示，

EB病毒：

EB病毒上游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:10所示，

EB病毒下游引物：核苷酸序列如SEQ ID NO:11所示，

EB病毒探針：核苷酸序列如SEQ ID NO:12所示；

所述單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒探針上分別帶有不同的熒光報告基團，所述熒光報告基團選自6-羧基熒光素、VIC熒光染料、磺酰羅丹明或花菁5；所述熒光淬滅基團選自黑洞淬滅劑1或黑洞淬滅劑2。

2.根據權利要求1所述的針對單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的四重熒光PCR檢測用引物及探針，其特征在于，所述單純皰疹病毒探針的熒光報告基團為6-羧基熒光素，熒光淬滅基團為黑洞淬滅劑1；卡波氏肉瘤相關皰疹病毒的熒光報告基團為VIC熒光染料，熒光淬滅基團為黑洞淬滅劑1；JC病毒探針的熒光報告基團為磺酰羅丹明，熒光淬滅基團為黑洞淬滅劑2；EB病毒探針的熒光報告基團為花菁5，熒光淬滅基團為黑洞淬滅劑2。

3.一種單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒聯合檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的四種病毒的檢測用引物及探針。

4.根據權利要求3所述的單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒聯合檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒在使用時按以下比例配制引物、探針混合液：單純皰疹病毒擴增引物對與單純皰疹病毒檢測探針的摩爾比為3:1；卡波氏肉瘤相關皰疹病毒擴增引物對與卡波氏肉瘤相關皰疹病毒檢測探針的摩爾比為2:1；JC病毒擴增引物對與JC病毒檢測探針的摩爾比為2:1；EB病毒擴增引物對與EB病毒檢測探針的摩爾比為3:1；單純皰疹病毒檢測探針、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒檢測探針、JC病毒檢測探針、EB病毒檢測探針的摩爾比為3:2:2:3。

5.根據權利要求3所述的單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒聯合檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陽性對照品和陰性對照品，其中陰性對照品為不含有單純皰疹病毒、卡波氏肉瘤相關皰疹病毒、JC病毒和EB病毒的生理鹽水溶液；陽性對照品包括含有由如SEQ ID No.1及SEQ ID No.2所示序列擴增獲得的單純皰疹病毒靶序列的質粒、含有由如SEQ ID No.4及SEQ ID No.5所示序列擴增獲得的卡波氏肉瘤相關皰疹病毒靶序列的質粒、含有由如SEQ ID No.7及SEQ ID No.8所示序列擴增獲得的JC病毒靶序列的質粒和含有由如SEQ ID No.10及SEQ ID No.11所示序列擴增獲得的EB病毒靶序列的質粒。