[發明專利]一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法

在審

• 申請號: 202011118635.3
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112293251A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 黃衡宇;曾彪;陳建穎
• 申請（專利權）人: 云南中醫藥大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 昆明金科智誠知識產權代理事務所(普通合伙) 53216
• 代理人: 楊釗霞

1.一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，包括將消毒滅菌處理后的葉片外植體經愈傷組織誘導、叢生芽發生同步誘導、叢生芽增殖、不定根誘導和馴化移栽過程，具體包括如下步驟：

步驟1：外植體的獲取

選擇生長勢好、無病蟲害、無畸形的健壯植株，取其當年生葉片；

步驟2：消毒處理

將步驟1獲取的葉片進行消毒處理；

步驟3：愈傷組織誘導和叢生芽發生培養

將經過步驟2消毒滅菌好的葉片接入培養基A中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下進行愈傷組織誘導和叢生芽發生；

步驟4：叢生芽增殖培養

將步驟3中培養的叢生芽轉入新鮮的培養基A中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下進行叢生芽增殖培養；

步驟5：

取步驟4叢芽中的健壯主苗接種于下列培養基B中，控制光照度、溫度、光照時間的條件下獲得苗壯根粗的生根苗；

步驟6：煉苗和移栽。

2.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，步驟1中所述葉片進行消毒處理的方法為：

流水洗凈后用質量比為10％洗衣粉溶液浸泡5min，流水沖洗30min后置于超凈工作臺中；

用體積比75％乙醇溶液浸泡3-5s，然后用質量比為0.1％的升汞水溶液消毒5min，期間不斷搖晃瓶身以達到最佳滅菌效果，最后無菌水沖洗5次，每次不低于3min，置于濾紙上吸干殘留無菌水，最終得到消毒滅菌處理的外植體。

3.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，步驟3中和步驟4中，所述A培養基包括以下原料：

4.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，所述A培養基的pH值為5.6-5.8。

5.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，所述B培養基，包括以下原料：

1/2MS培養液

蔗糖 15000mg/L

瓊脂粉 4800mg/L。

6.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，所述B培養基的pH值為5.6-5.8。

7.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，步驟6中，煉苗和移栽的方法如下：

取步驟5的生根苗，連培養瓶一起置于室溫下煉苗3d，打開瓶蓋露苗2d，從培養基中取出幼苗，將殘留培養基清洗干凈，放入多菌靈溶液中浸泡3-5min后，移栽至消毒后的腐殖質中保溫保濕培養，即得移栽苗。

8.根據權利要求1所述的一種滇北球花報春人工高效繁殖的方法，其特征在于，步驟3-步驟5中，培養條件：在光照度1800-2300lx，光照時間8-10h/d，溫度控制在20±1℃。