[發明專利]一種腫瘤早早期動物模型的構建方法及其應用

在審

• 申請號: 202011118562.8
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112400806A
• 公開（公告）日: 2021-02-26
• 發明（設計）人: 尹悅;蔣瑞蘭;沈明望
• 申請（專利權）人: 蔣瑞蘭
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027;C12Q1/6886;C12Q1/6809;G16B20/00
• 代理公司: 西安智邦專利商標代理有限公司 61211
• 代理人: 屠沛

本發明提供一種腫瘤早早期動物模型的構建方法及其應用，解決現有造模存在的耗時長、成本高、以及無法應用在無癥狀者腫瘤篩查的問題。腫瘤早早期動物模型的構建方法包括以下步驟：1)對非人哺乳動物的腫瘤細胞進行體外培養和傳代擴增；2)將擴增后的腫瘤細胞胰酶消化，清洗重懸后計數；3)將清洗重懸后的腫瘤細胞稀釋為預先確定的早早期動物模型注射濃度；4)選擇與所述腫瘤細胞來源物種遺傳背景相匹配的非人哺乳動物，對其接種腫瘤細胞懸液；5)接種后14～30天，獲得早早期動物模型。本發明腫瘤早早期動物模型構建耗時短、成本低、操作簡易，并可用于腫瘤免疫研究和腫瘤早早期生物標志物的篩選。

技術領域

本發明屬于生物醫學技術領域，具體涉及一種腫瘤早早期動物模型的構建方法及其應用。

背景技術

惡性腫瘤的發病率和死亡率逐年增高，是全球重大的公共健康問題。目前，腫瘤的二級預防仍然主要依賴患者自覺臨床癥狀就診，確診金標準依靠病理組織活檢，而影像學、血清學檢查只能作為輔助手段。因此，出現臨床癥狀前或者影像學檢查無法篩查到的微小甚至顯微水平的腫瘤(稱之為早早期腫瘤)，是二級預防研究的重點。

目前的研究普遍認可免疫編輯理論，認為腫瘤發生過程中與免疫系統的相互作用分為三個階段：1)正常體內產生的腫瘤細胞會被免疫系統及時清除，即免疫監視；2)如果腫瘤細胞沒有被完全清除，機體進入免疫平衡階段，此階段免疫系統不能完全清除腫瘤細胞，腫瘤在免疫系統壓力下被重塑；3)隨著腫瘤進展最終突破免疫系統，進入免疫逃逸并出現臨床癥狀和體征；由此可見，免疫平衡階段是預防研究的重點。

以往研究免疫平衡階段的動物模型旨在描述免疫微環境的細胞表型，或探究免疫平衡的機制。研究造模多采用致癌劑誘導，也有研究皮膚黑色素瘤的動物模型采用皮膚接種法誘導免疫平衡；但是這些方法耗時較長，一般 5～12個月，研究需要基因改造鼠，成本較高，并且這類研究重點在于免疫平衡機制和免疫微環境，對應的是侵入性的臨床腫瘤病理檢查，對于已確診的腫瘤患者預后和治療有意義，卻在無癥狀者腫瘤篩查中很難應用。

因此，研究一個耗時短，成本較低，并且處于免疫平衡進入免疫逃逸期的早早期，且暫時未出現腫瘤或者腫瘤處于微小或顯微水平的早早期動物模型非常必要；并且，新的動物模型應用中需要明確生物標志物篩選研究的生物標本取材來源和方法，也是急需解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于解決現有造模存在的耗時長、成本高、以及無法應用在無癥狀者腫瘤篩查的問題，而提供了一種腫瘤早早期動物模型的構建方法及其應用。

為實現上述目的，本發明所提供的技術解決方案是：

一種腫瘤早早期動物模型的構建方法，其特殊之處在于，包括以下步驟：

1)對非人哺乳動物的腫瘤細胞進行體外培養和傳代擴增，以滿足后續建立模型的需求，培養使用的培養基種類與腫瘤細胞種類有關，如MEM、 DMEM或RMPI1640為基礎培養基再加入10％胎牛血清等；

2)將步驟1)擴增后的腫瘤細胞胰酶消化，清洗重懸后計數；

3)將步驟2)清洗重懸后的腫瘤細胞稀釋為預先確定的早早期動物模型注射濃度；

4)選擇與所述腫瘤細胞來源物種遺傳背景相匹配的非人哺乳動物，對其接種步驟3)得到的腫瘤細胞懸液；

5)接種后14～30天，獲得早早期動物模型；

以上步驟3)中所述確定早早期動物模型注射濃度的實驗過程如下：