[發明專利]一種使用可可粉生產高含量凝結芽孢桿菌芽孢益生菌的發酵方法及其應用

在審

• 申請號: 202011116991.1
• 申請日: 2020-10-19
• 公開（公告）號: CN112143685A
• 公開（公告）日: 2020-12-29
• 發明（設計）人: 陳磊;王銳;劉飛;馬文靖;陳勉;袁丹丹;李倩;牛林林;張曉元;張艷艷
• 申請（專利權）人: 濟南瑞隆安生物技術有限公司;山東省藥學科學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N3/00;C12P17/06;C12R1/07
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 宋海海

1.可可粉在凝結芽孢桿菌發酵中的應用。

2.如權利要求1所述應用，其特征在于，所述發酵為固體發酵。

3.如權利要求1所述應用，其特征在于，所述應用至少包括：

1)提高凝結芽孢桿菌產芽孢含量；

2)提高可可粉中黃酮苷元含量。

4.一種使用可可粉生產高含量凝結芽孢桿菌芽孢益生菌的發酵方法，其特征在于，所述方法包括：將活化后的凝結芽孢桿菌接種至液體培養基中進行擴大培養，待凝結芽孢桿菌進入對數生長初期時轉而將凝結芽孢桿菌液體菌液接種至固體培養基中此時同時向固體培養基中加入可可粉進行固體發酵即得。

5.如權利要求4所述發酵方法，其特征在于，所述“活化后的凝結芽孢桿菌接種至液體培養基”步驟中接種量控制為0.5～5％(w/w)，優選為2％。

6.如權利要求4所述發酵方法，其特征在于，所述液體培養基按質量百分比，由以下組分組成：葡萄糖1.2～1.8％(優選為1.5％)，蛋白胨1.0～1.4％(優選為1.2％)，酵母粉0.5～1.0％(優選為0.5％)，K₂HPO₄ 0.05～0.2％(優選為0.1％)，余量為水，pH為弱堿性，優選為7.5～8.0；更進一步的，所述液體培養基組成為：葡萄糖1.5％，蛋白胨1.2％，酵母粉0.5％，K₂HPO₄ 0.1％，余量為水，pH為7.5；

液體發酵培養條件包括：在35～45℃條件下培養16～20h，轉速控制為180～220rpm；優選為40℃培養18h，轉速控制為200rpm。

7.如權利要求4所述發酵方法，其特征在于，所述固體培養基包括培養基底物和添加物，其中，培養基底物為麥麩和糠粉的混合物，所述添加物包括碳源、氮源和鹽類；

優選的，麥麩和糠粉的混合物中，麥麩和糠粉的質量比為1～3：1，優選為1：1；

優選的，所述碳源為糖蜜，所述氮源為蛋白胨，所述鹽類為K₂HPO₄；

優選的，所述碳源添加量為培養基底物的0.1～0.3％(w/w，優選為0.2％)，所述氮源添加量為培養基底物的0.1～0.3％(w/w，優選為0.2％)，所述鹽類添加量為培養基底物的0.1～0.3％(w/w，優選為0.2％)；

優選的，麥麩、糠粉和可可粉粉粹過篩處理，所述篩目數為40-50目，優選為40目。

8.如權利要求4所述發酵方法，其特征在于，所述固體發酵具體方法為：按固體培養基質量的10～30％(優選20％)接種上述凝結芽孢桿菌液體菌液，同時按固體培養基質量的1～10％(優選3％)加入可可粉，控制含水量為30～60％(優選為50％)，調節初始pH為7.0～7.2。

9.如權利要求4所述發酵方法，其特征在于，所述固體發酵采用變溫發酵處理；優選的，置于35-40℃培養10～15h，然后在40-45℃繼續培養10～15h。

10.權利要求4-9任一項所述發酵方法在制備凝結芽孢桿菌制劑中的應用。