[發明專利]一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物及其制備方法

在審

• 申請號: 202011113229.8
• 申請日: 2020-10-17
• 公開（公告）號: CN112245488A
• 公開（公告）日: 2021-01-22
• 發明（設計）人: 夏爽;梁杰
• 申請（專利權）人: 鄭州佐爵生物科技有限公司
• 主分類號: A61K36/752
• 分類號: A61K36/752;A61K36/886;A61K36/896;A61P1/02;C12N5/0775;A61K31/198;A61K33/30;A61K35/28
• 代理公司: 鄭州芝麻繪智知識產權代理事務所(普通合伙) 41191
• 代理人: 李玲玲

本發明公開了一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物，包括以下重量份的原料：骨髓間充質干細胞培養產物3?5份，葡萄柚提取物1.5?2.5份、凝膠基質10?15份、純化水50?60份；骨髓間充質干細胞培養產物的制備過程如下：(1)分離人骨髓間充質干細胞；(2)將細胞接種于基礎培養基中進行原代培養；(3)取步驟(2)融合度達到85％?90％的細胞經胰酶消化后收集細胞，經清洗、勻漿、離心、透析、凍干，即得骨髓間充質干細胞培養產物。本發明提供的組合物，其中骨髓間充質干細胞培養產物為骨髓間充質干細胞經原代培養得到的培養產物，和葡萄柚提取物、凝膠基質配合使用，顯著提高骨髓間充質干細胞對口腔潰瘍的治療效果，產品還具有舒緩作用，同時延長作用時間。

技術領域

本發明涉及干細胞領域，尤其涉及一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物及其制備方法。

背景技術

口腔潰瘍，又稱為“口瘡”，是發生在口腔粘膜上的表淺性潰瘍，一般潰瘍的直徑在0.5厘米以內、成圓形或卵圓形，潰瘍面凹陷、周圍充血。潰瘍具有周期性、復發性及自限性等特點，好發于唇、頰、舌緣等。常常數個潰瘍一同出現，疼痛感強烈，輕則一周痊愈，重者會反復發作，難以治愈。口腔潰瘍的病因及致病機制仍不明確。誘因可能是局部創傷、精神緊張、食物、藥物、激素水平改變及維生素或微量元素缺乏等。系統性疾病、遺傳、免疫及微生物在其發生、發展中可能起重要作用。治療主要以局部治療為主，嚴重者需全身治療。目前，治療口腔潰瘍的方法有直接噴涂消炎殺菌粉末于患處，嚴重者口服消炎藥進行消炎，噴涂時劇痛無比，好多人難以接受，吃消炎藥藥效慢，并且傷腸胃，都不是最佳的選擇。

徐娜、陳書尚等于2015年發表的“含漱人骨髓間充質干細胞上清液對腎移植術后口腔潰瘍的療效”中報道了骨髓間充質干細胞上清液對腎移植后口腔潰瘍的療效。但上述文獻存在以下缺陷：一方面治療時間持續長，治療7天后顯效率僅為72％，不能有效縮短患者的痛苦時間；另一方面，該文獻僅公開了對腎移植后口腔潰瘍的療效，不清楚對其他原因引起的口腔潰瘍是否具有治療作用。因此骨髓間充質干細胞對口腔潰瘍的治療效果有待提高。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的目的之一在于提供一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物，縮短口腔潰瘍的愈合時間，并且對潰瘍處刺激較小，延長作用時間，減輕患者用藥的痛苦，有助于潰瘍面的痊愈。

本發明的目的之二在于提供一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物的制備方法。

本發明的目的之一采用如下技術方案實現：

一種用于治療口腔潰瘍的骨髓間充質干細胞組合物，其特征在于，包括以下重量份的原料：骨髓間充質干細胞培養產物3-5份，葡萄柚提取物1.5-2.5份、凝膠基質10-15份、純化水50-60份；

所述骨髓間充質干細胞培養產物的制備過程如下：

(1)分離人骨髓間充質干細胞：向骨髓中加入肝素抗凝，用PBS稀釋后加入淋巴細胞分離液，離心后取中間白膜層，用PBS洗滌后進行細胞計數；

(2)將步驟(1)分離得到的細胞接種于基礎培養基中進行原代培養，每2-3天更換培養基，至細胞融合度達到85％-90％，所述基礎培養基為低糖DMEM培養基，所述低糖DMEM培養基中包含添加劑、體積分數5％的胎牛血清，所述添加劑的組成為：重組人胰島素15-20mg/mL、乳酸鋅1-5mg/mL、L-茶氨酸45-50μg/mL、聚乙烯吡咯烷酮10-15mg/mL；

(3)取步驟(2)融合度達到85％-90％的細胞經胰酶消化后收集細胞，PBS清洗，對細胞進行勻漿處理，離心取上清液，將上清液經透析袋透析，取透析袋內的溶液凍干，即得骨髓間充質干細胞培養產物。

進一步地，所述凝膠基質為聚乙烯醇。

進一步地，步驟(2)中細胞接種濃度為1-2×10⁴個/mL。