[發(fā)明專利]一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011112980.6
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112237139A
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 曹樺;李涵;陸琳;李紳崇;張顥;姬語璐
• 申請（專利權(quán)）人: 云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院花卉研究所;玉溪澄花生物科技有限公司
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標(biāo)代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;蔣文睿

本發(fā)明一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法，其特征在于包括下列步驟：1）鐵皮石斛種子處理，2）鐵皮石斛種子物理誘變處理，3）消毒液配制，4）誘變種子的消毒，5）培養(yǎng)基Ⅰ的配制，6）誘變種子培養(yǎng)，7）培養(yǎng)基Ⅱ的配制，8）幼胚培養(yǎng)，9）培養(yǎng)基Ⅲ的配制，10）變異植株繁殖擴增，11）生根培養(yǎng)基的配制，12）生根植株的培養(yǎng)，13）變異植株的栽植。獲得葉色發(fā)生變異的鐵皮石斛種苗，變異率為5%，且變異穩(wěn)定，縮短新品種創(chuàng)造時間，為突變機理研究提供了豐富的材料，具有誘變效率高，操作方便的特點，為提高鐵皮石斛種苗變異率，促進(jìn)高效生物育種，提供可靠技術(shù)支持。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物育種領(lǐng)域，特別是涉及一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法。

背景技術(shù)

安全、高效的生物品種改造及高通量篩選/選擇技術(shù)，是生命科學(xué)及生命產(chǎn)業(yè)技術(shù)創(chuàng)新的重要方向，也是生物化工學(xué)科創(chuàng)新發(fā)展的動力。基于基因組突變的高效生物育種方法是生物技術(shù)領(lǐng)域的熱點和前沿，不僅可以成為生物誘變育種的平臺，而且也可與理性設(shè)計結(jié)合，為智慧集成生物育種技術(shù)發(fā)展提供支撐。

常壓室溫等離子體（ARTP）誘導(dǎo)技術(shù)是一種新型誘變技術(shù)，具有活性粒子種類多、操作可控性強、誘變速度快、操作條件溫和、安全性高等特點。現(xiàn)有技術(shù)中尚未找到適宜的鐵皮石斛種子誘變方法，致使鐵皮石斛的生物育種受到限制。因此有必要對現(xiàn)有技術(shù)加以改進(jìn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是如何提供一種能提高鐵皮石斛種子變異率的復(fù)合誘變方法。

本發(fā)明利用物理誘變，結(jié)合常壓室溫等離子體（ARTP）誘導(dǎo)技術(shù)，對鐵皮石斛種子進(jìn)行誘變，以顯著提高鐵皮石斛種子變異率，對鐵皮石斛種子進(jìn)行高效生物育種。

本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實現(xiàn)：一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法，其特征在于包括下列步驟：

1）鐵皮石斛種子處理，于無菌條件下，將鐵皮石斛已裂開的果莢裝入無菌離心管中，冰箱4℃保存；未裂開的果莢用錫紙包裹，冰箱4℃保存；

2）鐵皮石斛種子物理誘變處理，將步驟1）的鐵皮石斛果莢于無菌操作臺上，用手術(shù)刀破除未裂開的果莢，把所有種子放入盤中，將盤固定到誘變育種儀中，調(diào)整誘變育種儀的氦氣壓力為0.15-0.20MPa、功率為360W，進(jìn)行誘變處理3-7分鐘，得誘變種子；

3）消毒液配制，將優(yōu)潔1003消毒液加入到無菌蒸餾水中，至質(zhì)量濃度為0.2%，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min，得消毒液；

4）誘變種子的消毒，將步驟2）的誘變種子取出，放入經(jīng)高壓滅菌處理過的紗布袋中，置入質(zhì)量濃度為70%的酒精中浸泡1-2min、用無菌水洗滌2-4次；用質(zhì)量濃度為0.1%的升汞滅菌6-10min、用無菌水洗滌2-4次；用質(zhì)量濃度為10%的次氯酸鈉浸泡6-10min，用無菌水洗滌2-4次；用步驟3）的消毒液浸泡1-2min，取出，于無菌操作臺上，用無菌吸水紙吸干，得消毒后的誘變種子；

5）培養(yǎng)基Ⅰ的配制，將下列培養(yǎng)基：MS + NAA 0.05mg/l + 6-BA 0.1mg/l +香蕉泥50g/l +馬鈴薯泥25g/l +白糖 30g/l +瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得培養(yǎng)基Ⅰ；

6）誘變種子培養(yǎng)，將步驟4）消毒后的誘變種子放在步驟5）的培養(yǎng)基Ⅰ中，暗培養(yǎng)至種子萌發(fā)后，轉(zhuǎn)入1000lux弱光下，培養(yǎng)25-35天，得到幼胚；

7）培養(yǎng)基Ⅱ的配制，將下列培養(yǎng)基：MS + NAA 0.02mg/l+6-BA 0.5mg/l+香蕉泥 50g/l+馬鈴薯泥25g/l+白糖 30g/l+瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得培養(yǎng)基Ⅱ；