[發明專利]一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法

在審

• 申請號: 202011112980.6
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112237139A
• 公開（公告）日: 2021-01-19
• 發明（設計）人: 曹樺;李涵;陸琳;李紳崇;張顥;姬語璐
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所;玉溪澄花生物科技有限公司
• 主分類號: A01H1/06
• 分類號: A01H1/06;A01H4/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司 53100
• 代理人: 徐玲菊;蔣文睿

1.一種提高鐵皮石斛種子變異率的誘變方法，其特征在于包括下列步驟：

1）鐵皮石斛種子處理，于無菌條件下，將鐵皮石斛已裂開的果莢裝入無菌離心管中，冰箱4℃保存；未裂開的果莢用錫紙包裹，冰箱4℃保存；

2）鐵皮石斛種子物理誘變處理，將步驟1）的鐵皮石斛果莢于無菌操作臺上，用手術刀破除未裂開的果莢，把所有種子放入盤中，將盤固定到誘變育種儀中，調整誘變育種儀的氦氣壓力為0.15-0.20MPa、功率為360W，進行誘變處理3-7分鐘，得誘變種子；

3）消毒液配制，將優潔1003消毒液加入到無菌蒸餾水中，至質量濃度為0.2%，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min，得消毒液；

4）誘變種子的消毒，將步驟2）的誘變種子取出，放入經高壓滅菌處理過的紗布袋中，置入質量濃度為70%的酒精中浸泡1-2min、用無菌水洗滌2-4次；用質量濃度為0.1%的升汞滅菌6-10min、用無菌水洗滌2-4次；用質量濃度為10%的次氯酸鈉浸泡6-10min，用無菌水洗滌2-4次；用步驟3）的消毒液浸泡1-2min，取出，于無菌操作臺上，用無菌吸水紙吸干，得消毒后的誘變種子；

5）培養基Ⅰ的配制，將下列培養基：MS + NAA 0.05mg/l + 6-BA 0.1mg/l +香蕉泥50g/l +馬鈴薯泥25g/l +白糖 30g/l +瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得培養基Ⅰ；

6）誘變種子培養，將步驟4）消毒后的誘變種子放在步驟5）的培養基Ⅰ中，暗培養至種子萌發后，轉入1000lux弱光下，培養25-35天，得到幼胚；

7）培養基Ⅱ的配制，將下列培養基：MS + NAA 0.02mg/l+6-BA 0.5mg/l+香蕉泥 50g/l+馬鈴薯泥25g/l+白糖 30g/l+瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得培養基Ⅱ；

8）幼胚培養，將步驟6）的幼胚放在步驟7）的培養基Ⅱ中，在23-27℃、1000lux的無菌環境下培養60-90天，葉色白化、并在葉片邊緣或葉片上出現白色、黃色或其他顏色條紋，得變異植株；

9）培養基Ⅲ的配制，將下列培養基：MS + NAA 0.02mg/l+6-BA 0.5mg/l+香蕉泥 50g/l+馬鈴薯泥25g/l+白糖 30g/l+瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得培養基Ⅲ；

10）變異植株繁殖擴增，將步驟8）的變異植株放在步驟9）的培養基Ⅲ中，在22-27℃、2000lux的無菌環境下培養42-46天，使變異植株繁殖擴增；

11）生根培養基的配制，將下列培養基：MS + NAA 0.5mg/l +IBA 0.3mg/l +香蕉泥50g/l +馬鈴薯泥25g/l +白糖 30g/l +瓊脂 7g/l，于110-125℃、0.1Mpa條件下，高壓滅菌20-30min后，冷卻至室溫，得生根培養基；

12）生根植株的培養，將步驟10）繁殖擴增的變異植株移至步驟11）的生根培養基中，在22-26℃、2000lux的無菌環境下培養23-32天，得生根植株；

13）變異植株的栽植，步驟12）的生根植株的根長至3-5cm時，將植株連同培養基一同移至正常日光下過渡18-22天，之后取出，用清水清洗掉植株上的培養基后，移植至經清水泡發的格陸谷椰糠上，于26-30℃，80%濕度下進行栽植，110-130天后長出新根新芽，得變異苗，并以新芽的葉色變異作為最終的變異率進行統計。