[發明專利]一種檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 202011107494.5
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112255397B
• 公開（公告）日: 2022-06-07
• 發明（設計）人: 王娟;趙超;郭媛媛;李娟
• 申請（專利權）人: 吉林大學
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;B29C39/02;B29C39/00;B29C33/38;G01N21/64
• 代理公司: 長春眾邦菁華知識產權代理有限公司 22214
• 代理人: 李外

本發明提供一種同時檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒及其制備方法，屬于試劑盒領域。該試劑盒包括實時檢測自吸閥分隔式芯片；所述的實時檢測自吸閥分隔式芯片包括：自吸閥分隔式芯片、單核細胞增多性李斯特菌的FAM染料修飾特異性適配體、副溶血性弧菌的FAM染料修飾特異性適配體、鼠傷寒沙門菌的FAM染料修飾特異性適配體、空白對照FAM染料修飾適配體、HNB染料和氧化石墨烯。本發明對單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的最低檢測濃度分別為46.8、22.9和32.3CFU/mL，加標回收率達到97.11～10.40％，靈敏度高，穩定性好。

技術領域

本發明屬于試劑盒領域，具體涉及一種檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒及其制備方法。

背景技術

隨著經濟的發展及人民生活水平的提高，人口增長速度不斷加快，造成了流動人口的增加和飲食習慣的變化，隨之帶來的是消費者對新鮮和低加工食品的需求提高，加之食源性病原菌對環境的高度適應性，使得食源性病原菌一直是各國的主要公共衛生問題之一，每年都造成巨大的經濟損失。對美國的一項調查數據的評估顯示，每年約有940萬人感染食源性疾病，其中三分之一以上是由食源性病原菌感染引起。以單核細胞增多性李斯特菌為例，該病原菌可引起腸胃炎和發燒等癥狀，但因為常規糞便培養無法檢測到該病原菌，使得有時臨床診斷不會將這種病原菌感染作為診斷結果，從而導致延誤病情，與之相關的早期自然流產或流產也可能被忽略。因此，建立快速有效的食源性病原菌檢測方法至關重要。

傳統的分離鑒定方法簡單、穩定，但長達一周的檢測時間使得其無法滿足快速檢測的需要。此外比較常用的的免疫學方法則通常利用抗原和抗體結合，輔以不同的技術以檢測不同的靶標物質，例如酶聯免疫法，免疫熒光法，免疫膠體金法等。但抗體的制備通常需要很長時間，使用前需要對其效價進行表征，對于其在長期儲存狀態下的活性維持也是需要考慮的問題。與之相比，適配體的優點自然體現，不僅易于合成，其在低成本和高穩定性方面表現出的性能也同樣優異，并且在特異性方面可與抗體媲美的屬性使得它們在近年來的實際應用中被廣泛使用。

與此同時，PDMS材料憑借其良好的透光率，低成本，光學透明性，出色的可塑性和彈性以及從模具中獲得的高保真度等優勢被廣泛認知和應用，例如微流控芯片與成熟的PCR技術的結合在擴增速度，檢測限，樣品需求和檢測精度等方面顯示出許多出色的性能。因此，如何緊跟研究趨勢借助現有高優勢材料實現對目標病原菌的檢測，又能簡化操作，在短時間內獲得精準的檢測結果就成為我們下一步檢測技術的目標，對于傳染源及病患的確定也顯得至關重要。

發明內容

本發明目的是提供一種檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒及其制備方法，該試劑盒基于目標菌與其FAM修飾的特異性適配體結合恢復熒光，結合HNB熒光染料實現熒光信號雙重檢測，能夠快速、靈敏、簡便地檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌。

本發明首先提供一種檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒，該試劑盒包括實時檢測自吸閥分隔式芯片；

所述的實時檢測自吸閥分隔式芯片包括：自吸閥分隔式芯片、單核細胞增多性李斯特菌的FAM染料修飾特異性適配體、副溶血性弧菌的FAM染料修飾特異性適配體、鼠傷寒沙門菌的FAM染料修飾特異性適配體、空白對照FAM染料修飾適配體、HNB染料和氧化石墨烯。

本發明還提供一種檢測單核細胞增多性李斯特菌、副溶血性弧菌和鼠傷寒沙門菌的試劑盒的制備方法，包括：

步驟一：自吸閥分隔式芯片的制備

1)模具的制備