[發明專利]一種SARS-CoV-2假病毒小鼠體內包裝系統及其制備方法

有效

• 申請號: 202011106870.9
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN111926041B
• 公開（公告）日: 2020-12-25
• 發明（設計）人: 謝鵬;胡策;葉釗成
• 申請（專利權）人: 廣州吉妮歐生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C07K14/165;A01K67/027
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

本發明提供了一種假病毒小鼠體內包裝系統的制備方法，包括以下步驟：S1基于慢病毒包裝質粒系統和睡美人轉座子系統構建SARS?CoV?2假病毒包裝質粒系統，S2將步驟S1中SARS?CoV?2假病毒包裝質粒系統與睡美人轉座酶表達質粒混合通過水動力注射的方式轉染小鼠肝細胞，然后睡美人轉座子系統將SARS?CoV?2假病毒包裝所需序列以剪切粘貼的方式整合到小鼠肝細胞的基因組。本發明可在小鼠體內持續制造分泌SARS?CoV?2假病毒，可模擬靶器官被SARS?CoV?2病毒持續侵入攻擊的過程，從而可模擬出新冠肺炎（COVID?19）的病理特征。基于SARS?CoV?2假病毒小鼠體內包裝系統的動物模型安全性高，不需要P3級實驗室就能開展研究。利用水動力注射的方式引入SARS?CoV?2假病毒包裝質粒系統操作簡單，成本低。

技術領域

本發明屬于生物醫藥技術領域，具體涉及一種SARS-CoV-2假病毒小鼠體內包裝系統及其制備方法。

背景技術

SARS-CoV-2假病毒是表面包裹著SARS-CoV-2 Spike蛋白（S蛋白）的缺陷病毒顆粒，因而可以利用SARS-CoV-2同樣的病毒侵入機制（以ACE2作為受體）將攜帶的DNA或RNA序列導入細胞，但其攜帶的是不能指導再次生成病毒的序列，所以可用于研究單次侵入過程的機制及測試藥物干預效果，一般情況下實驗動物和操作者沒有實質性感染的風險。

目前假病毒包裝通常都是在體外培養的細胞系中完成，可用于SARS-CoV-2假病毒包裝的體系由human immunodeficiency virus-1 (HIV-1)或murine leukemia virus(MLV)等逆轉錄病毒改造而成。比如常用的慢病毒包裝質粒系統（由HIV-1改造而成）經改造后就可用于包裝SARS-CoV-2假病毒，即將包膜蛋白質粒中的VSV-G替換成SARS-CoV-2 S蛋白，轉染HEK293T細胞，即可生成SARS-CoV-2假病毒。

但是，體外包裝的SARS-CoV-2假病毒用于動物實驗時，只能逐次注射假病毒（比如尾靜脈注射）去感染動物，實驗的時間窗口短，而不能模擬SARS-CoV-2病毒對動物靶器官的持續侵入，且最佳時間窗口難以確定，評估藥物干預效果。

發明內容

本發明的目的是將現有的慢病毒包裝質粒體系改造成SARS-CoV-2假病毒包裝質粒體系，并通過注射方法導入到小鼠體內肝臟，讓小鼠肝臟能持續產生并分泌SARS-CoV-2假病毒顆粒。

為實現本發明的目的采用以下技術方案：

一種假病毒小鼠體內包裝系統的制備方法，包括以下步驟：

S1構建SARS-CoV-2假病毒包裝質粒系統；

S2將SARS-CoV-2假病毒包裝質粒系統與睡美人轉座酶（Sleeping Beautytransposase）表達質粒混合通過水動力注射的方式轉染小鼠肝細胞，然后睡美人轉座子系統將SARS-CoV-2假病毒包裝所需序列以剪切粘貼的方式整合到小鼠肝細胞的基因組。

作為本發明優選實施方式，所述步驟S1中的假病毒包裝質粒系統由包膜蛋白質粒（envelope plasmid）、包裝質粒（packaging plasmid）和轉移質粒（transfer plasmid）組成，其中所述包膜蛋白質粒中的包膜蛋白（ENV）由VSV-G替換成SARS-CoV-2 S蛋白。發明人首先將常用的慢病毒包裝系統的包膜蛋白替換成SARS-CoV-2 S蛋白，然后將包膜蛋白質粒、包裝質粒和轉移質粒中參與病毒包裝的序列作為目標序列分別插入到睡美人轉座子載體的一對反向末端重復序列（ITR）之間，構建成可以利用睡美人轉座子系統整合到細胞基因組中的SARS-CoV-2 S假病毒包裝質粒系統。