[發(fā)明專利]一種牙髓干細(xì)胞大規(guī)模常溫消化方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011106786.7
• 申請(qǐng)日: 2020-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112251401B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-04-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 葉青松;鄭麗娜;楊多佳;賀捷;陳以列;夏蒙婷;賀燕
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 浙江優(yōu)牙生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12N5/0775
• 分類號(hào): C12N5/0775
• 代理公司: 溫州金甌專利事務(wù)所(普通合伙) 33237
• 代理人: 王宏雷

1.一種牙髓干細(xì)胞大規(guī)模常溫消化方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）從培養(yǎng)箱中取出具有牙髓干細(xì)胞的培養(yǎng)瓶噴酒精后放至生物安全柜；

（2）倒液棄培養(yǎng)基上清液；

（3）加入DPBS清洗培養(yǎng)瓶并倒液棄除，棄除重組胰酶采用浸潤(rùn)后倒液棄除的方式；

（4）加入重組胰酶，加入的重組胰酶的量為1-5ml，溫和搖動(dòng)培養(yǎng)瓶使重組胰酶浸潤(rùn)細(xì)胞后立即棄除重組胰酶；

（5）放倒培養(yǎng)瓶在生物安全柜臺(tái)面上，常溫消化至大部分細(xì)胞開(kāi)始皺縮、細(xì)胞邊界明顯時(shí)，輕輕拍打培養(yǎng)瓶細(xì)胞面，常溫消化至大部分細(xì)胞開(kāi)始皺縮、細(xì)胞邊界明顯的時(shí)間為60-180s；

（6）倒入培養(yǎng)基終止消化；

（7）水平方向前后搖晃培養(yǎng)瓶使細(xì)胞從培養(yǎng)瓶上脫落，倒液轉(zhuǎn)移至儲(chǔ)液瓶，用移液管吹打細(xì)胞懸液至單細(xì)胞，即完成消化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牙髓干細(xì)胞大規(guī)模常溫消化方法，其特征在于，所述的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的牙髓干細(xì)胞為傳代的牙髓干細(xì)胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牙髓干細(xì)胞大規(guī)模常溫消化方法，其特征在于，所述的步驟（3）中加入DPBS的量為2-10ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種牙髓干細(xì)胞大規(guī)模常溫消化方法，其特征在于，所述步驟（6）中加入的培養(yǎng)基為5-10ml。