[發明專利]一種雙酶法拆分制備高純度共軛亞油酸異構體的方法

在審

• 申請號: 202011106608.4
• 申請日: 2020-10-16
• 公開（公告）號: CN112359073A
• 公開（公告）日: 2021-02-12
• 發明（設計）人: 李志剛;方穎琳;楊博;王永華;陳華勇
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: C12P7/64
• 分類號: C12P7/64;C12P41/00
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛鵬

本發明公開了一種雙酶法拆分制備高純度共軛亞油酸異構體的方法，包括(1)將共軛亞油酸混合異構體、醇與酶液混合進行酯化反應，后分層獲得上相產物；(2)上相產物加入堿液、醇和疏水性有機溶劑，分層，上相為富含c9，t11異構體的共軛亞油酸酯的溶劑相，減壓旋蒸得到富含c9，t11異構體的共軛亞油酸酯；取下層溶液調酸性后，加入疏水性有機溶劑和可溶性鹽形成三相，上相為富含t10，c12異構體的共軛亞油酸；(3)向步驟(2)的共軛亞油酸酯中加入可溶性鹽溶液、脂肪酶及親水性溶劑，進行酶催化水解反應，之后分層，上相中得到富含c9，t11異構體的共軛亞油酸。本發明反應條件溫和，拆分效率高，可實現鹽和酶的再利用。

技術領域

本發明屬于生物工程與食品技術領域，涉及到酶的分離與應用技術，特別涉及到利用脂肪酶拆分共軛亞油酸異構體的方法。

背景技術

共軛亞油酸是一種具有多種生理活性的功能性脂肪酸，在中國衛生部的第12號公告中被認為是新資源食品。共軛亞油酸具有抗腫瘤，抗動脈粥樣硬化，抗高血壓，降低脂肪沉積等作用，是一類有助于預防疾病安全降低人身體脂肪的物質，常被用于食品、保健品。

共軛亞油酸的不同異構體，主要存在形式是c9，t11和t10，c12異構體，具有不同的生理作用，c9，t11異構體具有抗腫瘤、抗癌活性，而t10，c12異構體則在降低機體脂肪積累方面有重要作用。目前的生產共軛亞油酸主要采用化學異構法，得到的是混合異構體，異構體的分離過程較為復雜。為了避免t10，c12異構體的副作用影響，制備高純度的c9，t11異構體是目前研究的熱點。但由于其異構體之間物理及化學性質相似，直接萃取、蒸餾等常規分離方法難以將其分離。采用尿素包合法和低溫結晶的方法，能夠在一定程度上將其分離，但總體純度不高，操作卻極為復雜，損失巨大。利用具有高選擇性的酶將一種異構體酯化或其酯化物水解，而另一種異構體以酸或酯的形式保留，最后再將兩種酸分別形成的性質不同的酸和酯分離，近年來受到了廣泛重視。多次酶法拆分是有利于獲得純度更高的異構體，例如NAGAO,Toshihiro嘗試利用兩次酯化，獲得了93.1％的純度的共軛亞油酸。但該分離提純過程需要多次分子蒸餾，以及酸堿處理萃取等，過程極為復雜，成本極高。更重要的是，該過程需要多次高溫加熱處理，而共軛亞油酸極易氧化，最終導致更多有害副產物的富集，而且需要消耗大量能量。而且在傳統的油水或微水的拆分體系中，酶的催化選擇性較低、產物酸和酯的分離需要堿洗、酸洗或高溫超低壓的分子蒸餾等一系列復雜過程，酸堿耗費嚴重、環境污染大、酶回用困難等難題讓其舉步維艱。因此需要開發一種高效、可控的連續催化及分離體系。

發明內容

本發明的目的是針對目前酶法拆分共軛亞油酸過程中，存在的成本高，反應操作復雜，連續化生產困難，異構體選擇性不高等問題，提供了一種高效快速的酶法拆分共軛亞油酸異構體的方法。

本發明的目的通過以下技術方案實現：

一種雙酶法拆分共軛亞油酸異構體的方法，包括如下步驟：

(1)將共軛亞油酸混合異構體、短鏈醇與脂肪酶或磷脂酶的酶液混合攪拌進行酯化反應，合成富含單一異構體的共軛亞油酸酯，離心或靜置分層，獲得上相產物；

(2)上述上相產物加入含乙醇的堿液和疏水性有機溶劑，離心或靜置分層，上層萃取相為富含c9，t11異構體的共軛亞油酸酯的溶劑相，減壓旋蒸得到富含c9，t11異構體的共軛亞油酸酯；取下層溶液加入酸調節溶液至酸性后，再加入疏水性有機溶劑和可溶性鹽形成三相，上相為富含t10，c12異構體的共軛亞油酸；中間相為富乙醇相，下層為富鹽相的可溶性鹽溶液；

(3)向步驟(2)的共軛亞油酸酯中加入可溶性鹽溶液、脂肪酶及親水性溶劑，攪拌條件下進行酶催化水解反應，反應結束后，離心或靜置使其分為三層，上相中得到富含c9，t11異構體的共軛亞油酸。

本發明步驟(2)和(3)中的可溶性鹽溶液可循環利用。