[發(fā)明專利]一種雙酶法拆分制備高純度共軛亞油酸異構(gòu)體的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011106608.4
• 申請(qǐng)日: 2020-10-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112359073A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-02-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志剛;方穎琳;楊博;王永華;陳華勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P7/64
• 分類號(hào): C12P7/64;C12P41/00
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 宮愛(ài)鵬

1.一種雙酶法拆分制備高純度共軛亞油酸異構(gòu)體的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)將共軛亞油酸混合異構(gòu)體、短鏈醇與脂肪酶或磷脂酶的酶液混合攪拌進(jìn)行酯化反應(yīng)，合成富含單一異構(gòu)體的共軛亞油酸酯，離心或靜置分層，獲得上相產(chǎn)物；

(2)上述上相產(chǎn)物加入含乙醇的堿液和疏水性有機(jī)溶劑，離心或靜置分層，上層萃取相為富含c9，t11異構(gòu)體的共軛亞油酸酯的溶劑相，減壓旋蒸得到富含c9，t11異構(gòu)體的共軛亞油酸酯；取下層溶液加入酸調(diào)節(jié)溶液至酸性后，再加入疏水性有機(jī)溶劑和可溶性鹽形成三相，上相為富含t10，c12異構(gòu)體的共軛亞油酸；中間相為富乙醇相，下層為富鹽相的可溶性鹽溶液；

(3)向步驟(2)的共軛亞油酸酯中加入可溶性鹽溶液、脂肪酶及親水性溶劑，攪拌條件下進(jìn)行酶催化水解反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，離心或靜置使其分為三層，上相中得到富含c9，t11異構(gòu)體的共軛亞油酸。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述短鏈醇與共軛亞油酸混合異構(gòu)體的摩爾比為1:0.5-3；步驟(1)所述短鏈醇為甲醇、乙醇、異丙醇、正丁醇、異戊醇和正辛醇中的一種或兩種以上。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(1)酯化反應(yīng)條件為:反應(yīng)時(shí)間為0.5-48h，反應(yīng)溫度為15-50℃；加酶量為80-200U/g，相對(duì)于共軛亞油酸異構(gòu)體混合物質(zhì)量。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，步驟(2)的堿液為濃度0.1-10mol/L的氨水-乙醇溶液、氫氧化鈉-乙醇溶液和氫氧化鉀-乙醇溶液中的一種或兩種以上；其中乙醇的濃度為10-50％；

步驟(2)所述疏水性有機(jī)溶劑為正己烷、乙酸乙酯、異辛烷、異丙醚中的一種或兩種以上；

步驟(2)所述酸為鹽酸、硫酸、磷酸、硝酸的一種或兩種。

5.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于，步驟(2)和(3)所述可溶性鹽為硫酸鈉、硫酸銨、磷酸氫二鉀，碳酸鈉、磷酸二氫鉀中的一種或兩種以上；

步驟(3)所述的親水性溶劑為聚乙二醇、聚丙二醇、葡聚糖、正丙醇、異丙醇、正丁醇、異丁醇、乙二醇和丙酮中的一種或兩種以上；或者所述親水性溶劑為[BMIM]Br、[BMIM]BF₄、[EMIM]ETSO₄、[OMIM]Cl中的一種或兩種以上。

6.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于，步驟(1)所述脂肪酶為L(zhǎng)ipaseAYS，Lipase AY 30，CALB，Novozyme 435，磷脂酶為PLA2，PLC，PLD；步驟(3)所述的脂肪酶為L(zhǎng)ipase AYS，Lipase AY 30，CALB，Novozyme 435。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述可溶性鹽溶液的濃度為10％～40％。

8.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3或4所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的親水性溶劑、脂肪酶、共軛亞油酸酯與可溶性鹽溶液的質(zhì)量比為0.2-0.8、0.005-0.5、0.05-0.8。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的體系pH為5-9；反應(yīng)條件為:時(shí)間為0.5-24h，溫度25-55℃。