[發明專利]牛誘導擴展多能性成體干細胞、建系方法及培養液

在審

• 申請號: 202011105359.7
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN114369577A
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發明（設計）人: 李喜和;趙麗霞;王子馨
• 申請（專利權）人: 內蒙古大學;內蒙古賽科星家畜種業與繁育生物技術研究院有限公司
• 主分類號: C12N5/10
• 分類號: C12N5/10;C12N5/074
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種牛誘導擴展多能性成體干細胞、建系方法及培養液，通過從牛成纖維體細胞中轉基因、誘導培養得到，并能夠在體外穩定傳代培養。該干細胞具有全能性、穩定性和安全性，能在體內外向胚胎和胚胎外組織分化，可用于育種繁育、基因編輯、動物克隆、醫學模型、藥物開發載體和誘導生產牛生殖配子等多種生命科學以及醫學領域的應用。

技術領域

本發明屬于細胞生物學和分子生物學技術領域，具體涉及一種牛誘導擴展多能性成體干細胞、建系方法及培養液。

背景技術

誘導多能干細胞(iPSCs)是將特定轉錄因子導入到體細胞，誘導其細胞核重編程而得到的干細胞，是通過在分化的細胞中表達特定的幾個轉錄因子，誘導體細胞的重編程而獲得的可不斷自我更新且具有多向分化潛能的細胞。誘導多能干細胞(iPSCs)除了可以無限的自我更新并能分化為包括三個胚層在內的所有細胞類型外，最大的特點是不需使用胎兒或胚胎，而是將分化細胞通過基因表達的調整直接重編程到多能性階段，在研究體細胞重編程和再生醫學方面具有深遠影響。

目前研究已經報道了小鼠(Establishment in culture of pluripotentialcells from mouse embryos[J].Nature，1981，292(5819):154-156.)、人(Embryonic StemCell Lines Derived from Human Blastocysts[J].Science，1998，282(5391):1145-1147.)、大鼠(Germline Competent Embryonic Stem Cells Derived from RatBlastocysts[J].Cell，2008，135(7):1299-1310.)、豬(Establishment of porcine andhuman expanded potential stem cells[J].Nature Cell Biology，2019，21(6):687-699.)、羊、馬、牛的iPS細胞，但大動物iPS的多能性特別是嵌合體形成和生殖細胞傳代還沒有得到確認。李榮風等(Establishment of bovine trophoblast stem-Like cells fromIn vitro-produced blastocyst-stage embryos using two inhibitors[J].Stem Cellsand Development，2014，23(13):1501-1514.)研究報道從附植前的胚胎細胞中獲得牛滋養層干細胞(BTSCs)，該細胞注射NOD-SCID小鼠能形成畸胎瘤，并在體外分化成胎盤樣細胞。吳俠等(Establishment of bovine embryonic stem cells after knockdown of CDX2[J].Scientific Reports，2016，6(1):28343-28343.)從CDX2敲出的胚胎中獲得牛擴展多能性胚胎干細胞(CDX2-KD bESCs)，具有體內外分化能力，但沒有形成嵌合體。趙麗霞等(Characterization of the single-cell derived bovine induced pluripotent stemcells[J].TissueCell，2017，49(5):521-527)轉入牛源四因子Oct4、Sox2、Klf4、cMyc到牛體細胞中獲得具有三胚層分化能力的牛誘導多功能干細胞。Yanina Soledad Bogliotti等(Efficient derivation of stable primed pluripotent embryonic stem cells frombovine blastocysts[J].Proceedings of the National Academy of Sciences of theUnited States of America，2018，115(9):2090-2095.)從牛胚胎中獲得了激發態胚胎干細胞(primed bESCs)，該干細胞沒有報道形成嵌合體，其全能性不如小鼠原始態胚胎干細胞(naive mESCs)。

發明內容