[發(fā)明專利]一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011103773.4
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112790159B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高社干;郭藝博;孫蔚;劉怡文;孔金玉;米優(yōu)嘉;張頂彧;張寧;梁夢夏;原翔
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 河南廣文律師事務(wù)所 41124
• 代理人: 王自剛

1.一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法，其特征在于：具體步驟如下：

一、標(biāo)本采集：通過臨床食管癌患者病例篩選，于手術(shù)室采集食管腫瘤標(biāo)本和患者血液標(biāo)本；

二、標(biāo)本運輸：標(biāo)本離體后用鹽水適當(dāng)沖洗，接著轉(zhuǎn)入含有細胞培養(yǎng)基RPMI-1640 /DMEM的50ml離心管中，并與患者血液標(biāo)本一同置于冰上運送至動物中心；

三、血液標(biāo)本預(yù)處理：將患者血液標(biāo)本進行離心，在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)用移液槍吸取血清至多個EP管內(nèi)，每個EP管內(nèi)放置1ml，并將放置標(biāo)本的EP管放置冰上，供移植時所用，剩余的凍存于負(fù)80度冰箱供傳代時所用；

四、腫瘤標(biāo)本預(yù)處理：在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)剔除腫瘤的部分壞死組織，經(jīng)生理鹽水沖洗后將腫瘤切成尺寸為0.2x0.2x0.2cm大小，將待接種的腫瘤分為兩組放入含有生理鹽水的100mm培養(yǎng)皿中加蓋置于冰上；

五、小鼠接種：選取偶數(shù)只4-6周齡的BALB/c-nu/nu 小鼠，均分為2組，一組作為實驗組，一組作為對照組；實驗組接種經(jīng)患者血清預(yù)處理后的腫瘤，對照組接種用生理鹽水處理后的腫瘤，接種過程均在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)進行，接種部位于小鼠皮下左側(cè)近腋窩處，接種前后均需對接種部位創(chuàng)口進行消毒處理；所述的血清預(yù)處理是用與腫瘤標(biāo)本相同來源的患者血清對待接種的腫瘤標(biāo)本進行37°恒溫孵育5分鐘后再移植入小鼠體內(nèi)；使用的穿刺植入針為25號套管針；

六、令小鼠自然生長，每周觀察檢測兩組小鼠的各項指標(biāo)，8周后對比兩組的成瘤情況；

七、 8周后將兩組小鼠的腫瘤剝離進行傳代，仍將新的偶數(shù)只同為4-6周齡的BALB/c-nu/nu 小鼠分為兩組，一組作為傳代實驗組，一組作為傳代對照組；按照傳代實驗組接種經(jīng)患者血清預(yù)處理后的腫瘤，傳代對照組接種用生理鹽水處理后的腫瘤的分組進行，方法同上述步驟四、五；

八、令小鼠自然生長，每周觀察檢測兩組小鼠的各項指標(biāo)，8周后對比傳代兩組的成瘤情況。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建立食管癌PDX小鼠模型的方法，其特征在于：所述步驟一中，采集沒有注入麻藥的患者血液標(biāo)本。