[發(fā)明專利]一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011103773.4
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112790159B
• 公開（公告）日: 2022-12-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 高社干;郭藝博;孫蔚;劉怡文;孔金玉;米優(yōu)嘉;張頂彧;張寧;梁夢夏;原翔
• 申請（專利權(quán)）人: 河南科技大學(xué)
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 河南廣文律師事務(wù)所 41124
• 代理人: 王自剛

本發(fā)明公開了一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法，通過臨床食管癌患者病例篩選，于手術(shù)室采集食管腫瘤標(biāo)本和病人血液樣本，將病人血液標(biāo)本進(jìn)行離心，在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)用移液槍吸取血清至多個EP管內(nèi)，每個EP管內(nèi)放置1ml，并將放置標(biāo)本的EP管放置冰上，供移植時所用，剩余的凍存于負(fù)80度冰箱供傳代時所用；血清預(yù)處理是用與腫瘤標(biāo)本相同來源的患者血清對待接種的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行37°恒溫孵育5分鐘后再移植入小鼠體內(nèi)；本發(fā)明成功率高、能夠穩(wěn)定傳代，周期短。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法。

背景技術(shù)

食管癌是世界上最常見的六大惡性腫瘤之一，中國是世界上食管癌發(fā)病率最高的國家。多年以來，眾多從事食管癌防治工作者銳意創(chuàng)新，在食管癌的流行病學(xué)、早期診斷、綜合治療及預(yù)防等方面取得了舉世矚目的成績，但是食管癌的防治工作仍舉步維艱，總體還未達(dá)到令人滿意的程度，特別是在藥物篩選，開發(fā)新藥方面尚未取得巨大突破。

為研究開發(fā)新藥，找到藥物的特異性靶點和準(zhǔn)確預(yù)測療效，腫瘤動物模型的研究不可或缺。常見的腫瘤動物模型為人源腫瘤細(xì)胞系異種移植(cell-line-derivedxenograft, CDX)和人源腫瘤組織來源移植瘤模型（patientl derived xenograft, PDX),二者的主要區(qū)別在于用于建立CDX動物模型的“原材料”為腫瘤細(xì)胞，而用于建立PDX動物模型的則是從患者體內(nèi)采集的腫瘤標(biāo)本。CDX作為純腫瘤細(xì)胞衍生的腫瘤動物模型，其成功率和傳代率自然比PDX高出許多，但其與患者的親源性則大大降低，因此在腫瘤藥物研究過程中無法對該藥物療效做出準(zhǔn)確預(yù)測；而PDX則剛好可以彌補這一缺陷，其可以完全或部分在免疫缺陷小鼠體內(nèi)模擬腫瘤在人體內(nèi)生存的環(huán)境,大大增加了腫瘤動物模型與人體的親源性，同時也可在小鼠體內(nèi)維持腫瘤的生物學(xué)、組織病理學(xué)的特性，從而為腫瘤藥物藥效研究提供更加精確可靠的預(yù)測依據(jù)。

在現(xiàn)有PDX小鼠建模技術(shù)中，從患者體內(nèi)采集到的腫瘤標(biāo)本在移植于免疫缺陷型小鼠后，盡管基于小鼠的免疫缺陷性這一特征可以成功附著于小鼠皮下并生長，但由于該腫瘤標(biāo)本仍帶有一定的患者自身的免疫力，所以在腫瘤與小鼠之間仍存在一定程度的免疫排斥反應(yīng)，導(dǎo)致移植的腫瘤短期內(nèi)無法完全定植附著于小鼠皮下達(dá)到腫瘤正常的生長狀態(tài)，同時尚未完全定植的腫瘤還容易由于供血不足等原因而發(fā)生壞死，最終影響建模及傳代的成功率、延長了建模周期。

基于現(xiàn)有技術(shù)的食管癌PDX小鼠模型成功率低、傳代不穩(wěn)定、周期長等缺陷，導(dǎo)致PDX動物模型目前無法得到大規(guī)模、常規(guī)化應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題，本發(fā)明成功率高、能夠穩(wěn)定傳代，周期短。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種建立食管癌PDX小鼠模型的方法，具體步驟如下：

一、標(biāo)本采集：通過臨床食管癌患者病例篩選，于手術(shù)室采集食管腫瘤標(biāo)本和病人血液樣本；

二、標(biāo)本運輸：標(biāo)本離體后用鹽水適當(dāng)沖洗，接著轉(zhuǎn)入含有細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640/DMEM的50ml離心管中，并與病人血液樣本一同置于冰上運送至動物中心；

三、血液標(biāo)本預(yù)處理：將病人血液標(biāo)本進(jìn)行離心，在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)用移液槍吸取血清至多個EP管內(nèi)，每個EP管內(nèi)放置1ml，并將放置標(biāo)本的EP管放置冰上，供移植時所用，剩余的凍存于負(fù)80度冰箱供傳代時所用；

四、腫瘤標(biāo)本預(yù)處理：在經(jīng)紫外消毒后的超凈工作臺內(nèi)剔除腫瘤的部分壞死組織，經(jīng)生理鹽水沖洗后將腫瘤切成米粒大小，將待接種的腫瘤分為兩組放入含有生理鹽水的100mm培養(yǎng)皿中加蓋置于冰上；