[發(fā)明專利]產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖的基因工程菌及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011102427.4
• 申請(qǐng)日: 2020-10-15
• 公開（公告）號(hào): CN112342176A
• 公開（公告）日: 2021-02-09
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張濤;江波;李夢(mèng)麗;李晨晨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/21
• 分類號(hào): C12N1/21;C12N15/70;C12N9/90;C12N9/38;C12N9/12;C12N9/10;C12N9/04;C12P19/00;C12R1/19
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖的工程菌，其特征在于，所述工程菌敲除了β-半乳糖苷酶基因lacZ和UDP-葡萄糖脂質(zhì)載體轉(zhuǎn)移酶基因wcaJ，并過表達(dá)了磷酸甘露糖變位酶manB、甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉(zhuǎn)移酶manC、GDP-甘露糖-6-脫氫酶gmd，GDP-巖藻糖合成酶wcaG、α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶futC和乳糖通透酶lacY。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌，其特征在于，利用啟動(dòng)子T7或tac對(duì)基因進(jìn)行過表達(dá)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌，其特征在于，利用pRSFDuet-1、pETDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1和pCOLADuet-1載體進(jìn)行過表達(dá)。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌，其特征在于，利用載體pRSFDuet-1或pETDuet-1表達(dá)磷酸甘露糖變位酶manB、甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉(zhuǎn)移酶manC、GDP-甘露糖-6-脫氫酶gmd和GDP-巖藻糖合成酶wcaG的基因；并利用載體pRSFDuet-1、pETDuet-1、pCDFDuet-1或pACYCDuet-1表達(dá)α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶futC和乳糖通透酶lacY的基因。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的工程菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主。

6.一種生產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖的方法，以權(quán)利要求1～5任一所述的工程菌為發(fā)酵菌株，在以甘油或葡萄糖為底物的發(fā)酵體系中生產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，以IPTG和乳糖為誘導(dǎo)劑，乳糖在發(fā)酵體系中的濃度為4～25g/L，或至100g/L以上。

8.一種提高大腸桿菌產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖產(chǎn)量的方法，其特征在于，敲除大腸桿菌中的β-半乳糖苷酶基因lacZ和UDP-葡萄糖脂質(zhì)載體轉(zhuǎn)移酶基因wcaJ，并過表達(dá)磷酸甘露糖變位酶manB、甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉(zhuǎn)移酶manC、GDP-甘露糖-6-脫氫酶gmd、GDP-巖藻糖合成酶wcaG、α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶futC和乳糖通透酶lacY。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于，利用pRSFDuet-1、pETDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1、pCOLADuet-1載體過表達(dá)磷酸甘露糖變位酶manB，甘露糖-1-磷酸鳥嘌呤基轉(zhuǎn)移酶manC，GDP-甘露糖-6-脫氫酶gmd，GDP-巖藻糖合成酶wcaG基因；利用pRSFDuet-1、pETDuet-1、pCDFDuet-1、pACYCDuet-1、pCOLADuet-1載體過表達(dá)α-1,2巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶futC和乳糖通透酶lacY基因。

10.權(quán)利要求1～5任一所述工程菌在生產(chǎn)2’-巖藻糖基乳糖及含有2’-巖藻糖基乳糖的產(chǎn)品中的應(yīng)用。