[發明專利]檢測樣本中基因突變位點的試劑在制備診斷MRKH綜合征I型試劑盒中的應用

有效

• 申請號: 202011101803.8
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112626190B
• 公開（公告）日: 2022-05-24
• 發明（設計）人: 朱蘭;馬聰聰;陳娜;吳南;趙森
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11;C12N15/12
• 代理公司: 浙江永鼎律師事務所 33233
• 代理人: 方惠琴

本發明公開了一種檢測樣本中基因突變位點的試劑在制備診斷MRKH綜合征I型試劑盒中的應用，所述基因突變位點為TBX6基因上的突變位點c.423GA。專利權人通過對442名MRKH受試患者進行外顯子組測序，首次在TBX6基因上發現了該突變位點c.423GA；經驗證，該突變位點c.423GA會導致TBX6基因轉錄過程中mRNA上四號外顯子起始端71bp堿基缺失，引起剪接異常，使基因表達產物因喪失功能而引發MRKH。因此通過采集受檢者外周血，獲取DNA，通過Sanger測序檢測TBX6基因上是否存在該突變位點c.423GA，即可輔助MRKH綜合征的快速診斷。

技術領域

本發明屬于醫學檢測技術領域，特別涉及一種檢測樣本中基因突變位點的試劑在制備診斷MRKH綜合征I型試劑盒中的應用。

背景技術

女性胚胎期苗勒管發育異常，導致先天性無陰道合并無子宮或僅有始基子宮，即MRKH綜合征（Mayer-Rokitansky-Küster-Hauser syndrome），發病率為1/5000-1/4000。主要臨床特征包括：無子宮或實性始基子宮結節，極少部分患者雖有功能性子宮內膜但子宮發育不良；陰道完全缺失，或陰道上2/3缺失、下1/3呈穴狀，其頂端為盲端；輸卵管、卵巢發育正常，第二性征為正常女性，染色體核型為女性核型46，XX。MRKH綜合征主要分為兩種類型，其中Ⅰ型（單純型）表現為單純子宮、陰道發育異常，而泌尿系統、骨骼系統發育正常，此型最為常見；Ⅱ型（復雜型）表現為除子宮、陰道發育異常外，還伴有泌尿、骨骼系統或其他系統發育異常。

MRKH綜合征的患者女性第二性征發育正常，多因青春期原發性閉經就診發現，少數患者以婚后性生活困難或周期性下腹痛為主訴癥狀。因患者青春期后無月經來潮、無法正常性生活、不具生育能力，僅可成年后通過人工陰道成型術解決性生活的困難，對患者身心影響巨大。

應用微陣列、比較基因組雜交（array-CGH）、DNA測序等技術已檢測出某些染色體畸變（chromosomal aberration）、基因突變等可能是MRKH綜合征的致病因素。研究者通過檢測染色體畸變位點來篩選相關的基因，并判別相關基因在MRKH綜合征中的致病性。既往文獻報道，染色體16p11.2區域的片段缺失在約2%的MRKH綜合征患者中發現，是MRKH綜合征最常見的染色體畸變之一，而定位于該區域的TBX6基因被認為是可能性較大的可疑致病基因。Sandakan等在MRKH綜合征患者中發現TBX6基因的剪切位點突變（622-2AT），該突變位于五號外顯子的剪接受體位點，因此該突變很可能降低了五號外顯子的正確剪接；Tewes等人在167名MRKH患者中發現5例攜帶TBX6基因的錯義突變；Tbx6基因敲除的雌性小鼠中也表現出泌尿生殖系統畸形。因此研究人員猜想TBX6基因突變可能是MRKH綜合征的致病原因之一，在早期對基因突變位點進行檢測能夠實現盡早、盡快確診。

發明內容

本發明的發明目的是提供一種檢測樣本中基因突變位點的試劑在制備診斷MRKH綜合征I型試劑盒中的應用。

為實現上述發明目的，本發明的技術方案如下：

一種MRKH綜合征診斷標記物，該MRKH綜合征診斷標記物為帶有突變位點c.423GA的TBX6基因片段。

專利權人通過對442名MRKH受試患者進行外顯子組測序，首次在TBX6基因上發現了突變位點c.423GA（p.Leu141=），該突變位點經Sanger測序確認為真性突變；經驗證，該突變位點c.423GA會導致TBX6基因在轉錄過程中mRNA上四號外顯子起始端71bp堿基缺失，引起剪接異常，使TBX6基因的表達產物因喪失功能而導致MRKH綜合征。