[發明專利]一種環糊精葡萄糖基轉移酶突變體及其構建方法有效
| 申請號： | 202011101602.8 | 申請日： | 2020-10-15 |
| 公開（公告）號： | CN112301012B | 公開（公告）日： | 2022-04-15 |
| 發明（設計）人： | 吳敬;王蕾;孔德民 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N9/10 | 分類號： | C12N9/10;C12N15/54;C12P19/18;C12P19/04;C12P19/44;C12R1/19 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 環糊精 葡萄 糖基轉移酶 突變體 及其 構建 方法 | ||
1.一種環糊精葡萄糖基轉移酶突變體，其特征在于，所述突變體為以下(a)～(d)任一：
(a)將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位氨基酸由亮氨酸突變為苯丙氨酸；
(b)將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第282位氨基酸由甘氨酸突變為丙氨酸；
(c)將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位和第282位氨基酸由亮氨酸和甘氨酸分別突變為甲硫氨酸和丙氨酸；
(d)將出發氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位和第282位氨基酸由亮氨酸和甘氨酸分別突變為苯丙氨酸和丙氨酸。
2.編碼權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶突變體的基因。
3.攜帶權利要求2所述基因的重組載體。
4.如權利要求3所述的重組載體，其特征在于，所述載體為pET質粒、Duet質粒、pGEX質粒、pHY300質粒、pHY300PLK質粒、pPIC3K質粒或pPIC9K質粒。
5.攜帶權利要求2所述基因或權利要求3所述重組載體的細胞。
6.如權利要求5所述的細胞，其特征在于，所述細胞為細菌或真菌。
7.一種提高環糊精葡萄糖基轉移酶催化效率或環糊精葡萄糖基轉移酶歧化活力與水解活力比值的方法，其特征在于，所述方法為：
將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位氨基酸由亮氨酸突變為苯丙氨酸；
或將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第282位氨基酸由甘氨酸突變為丙氨酸；
或將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位和第282位氨基酸由亮氨酸和甘氨酸分別突變為甲硫氨酸和丙氨酸；
或將氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的環糊精葡萄糖基轉移酶的第277位和第282位氨基酸由亮氨酸和甘氨酸分別突變為苯丙氨酸和丙氨酸。
8.權利要求1所述環糊精葡萄糖基轉移酶突變體，或權利要求2所述基因，或權利要求3或4所述重組載體，或權利要求5或6所述細胞在(a)～(c)至少一方面的應用：
(a)水解淀粉或水解麥芽糊精；
(b)提高環糊精葡萄糖基轉移酶催化效率；
(c)提高環糊精葡萄糖基轉移酶歧化活力與水解活力比值。
9.一種制備淀粉糖或糖苷化合物的方法，其特征在于，所述方法為將權利要求1所述的環糊精葡萄糖基轉移酶突變體或權利要求5或6所述的細胞添加至含有淀粉的反應體系中進行反應。
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