[發(fā)明專利]白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑、試紙、試劑盒及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011100731.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-15
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112269024A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-26
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐蕊萍;婁珺;周偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海捷門生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N33/58;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 上海上谷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31342
• 代理人: 蔡繼清

本申請(qǐng)公開(kāi)了一種白細(xì)胞介素?6的檢測(cè)試劑、試紙、試劑盒及其應(yīng)用。具體地，白細(xì)胞介素?6的檢測(cè)試劑包含標(biāo)記有白細(xì)胞介素?6抗體的羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球；且羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球通過(guò)鏈霉親和素和生物素被白細(xì)胞介素?6抗體標(biāo)記。本發(fā)明還公開(kāi)了包含該檢測(cè)試劑的檢測(cè)試紙和試劑盒，以及其應(yīng)用方法。該檢測(cè)試劑基于熒光免疫層析法開(kāi)發(fā)，使得使用該檢測(cè)試劑檢測(cè)白細(xì)胞介素?6時(shí)操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明實(shí)施例涉及激素檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑、試紙、試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

白細(xì)胞介素-6，簡(jiǎn)稱白細(xì)胞介素-6(白細(xì)胞介素-6)，是一種細(xì)胞因子，屬于白細(xì)胞介素的一種，主要由巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴細(xì)胞以及T細(xì)胞等多種細(xì)胞產(chǎn)生。白細(xì)胞介素-6能夠刺激參與免疫反應(yīng)的細(xì)胞增殖、分化并提高其功能。開(kāi)發(fā)能夠快速、特異的檢測(cè)血液中的白細(xì)胞介素-6的含量對(duì)多種疾病的早期診斷、治療以及預(yù)后具有重要作用。目前，白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)主要方法為化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法。

專利CN104330551A公布了一種基于化學(xué)發(fā)光法的免疫熒光定量檢測(cè)白細(xì)胞介素-6的試劑盒，以異硫氰酸熒光素標(biāo)記的白細(xì)胞介素-6包被抗體和堿性磷酸酶標(biāo)記的白細(xì)胞介素-6標(biāo)記抗體制備抗試劑，以抗異硫氰酸熒光素抗體偶聯(lián)羧基磁珠制得磁微粒試劑，雙夾心法結(jié)合白細(xì)胞介素-6，以新型化學(xué)發(fā)光底物ALPS為底物，用化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度進(jìn)行定量。然而該試劑盒的制備步驟較復(fù)雜，需要成本較高，檢測(cè)時(shí)需要水浴、分離等過(guò)程，操作多，耗時(shí)長(zhǎng)。

專利CN103969438A公布了一種采用定量夾心酶聯(lián)免疫方法來(lái)檢測(cè)白細(xì)胞介素-6。然而該方法檢測(cè)步驟有酶標(biāo)板的包被及封閉、標(biāo)準(zhǔn)品或被檢血清的處理、單克隆抗體檢測(cè)、檢測(cè)過(guò)程中孵化時(shí)間長(zhǎng)、洗板次數(shù)多，需要配套設(shè)備和專業(yè)人員。

本發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)現(xiàn)有技術(shù)中：化學(xué)發(fā)光法和酶聯(lián)免疫法均檢測(cè)步驟多耗費(fèi)時(shí)間較長(zhǎng)。熒光免疫層析法是基于抗原抗體特異性免疫反應(yīng)的新型膜檢測(cè)技術(shù)，可根據(jù)熒光強(qiáng)度對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性定量分析，具有操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高等優(yōu)點(diǎn)。因此，本領(lǐng)域有必要嘗試開(kāi)發(fā)基于熒光免疫層析法的白細(xì)胞介素-6檢測(cè)試劑。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明實(shí)施方式的目的在于提供一種白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑，該檢測(cè)試劑基于熒光免疫層析法開(kāi)發(fā)，使得使用該檢測(cè)試劑檢測(cè)白細(xì)胞介素-6時(shí)操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、選擇性強(qiáng)、準(zhǔn)確度高。

為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的第一方面提供了一種白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑，所述白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑包含標(biāo)記有白細(xì)胞介素-6抗體的羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球；所述羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球通過(guò)鏈霉親和素和生物素被白細(xì)胞介素-6抗體標(biāo)記。

本發(fā)明實(shí)施方式相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)而言，白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑基于熒光免疫層析法開(kāi)發(fā)，利用時(shí)間分辨熒光微球的具有極寬的stoke位移、極長(zhǎng)的熒光猝滅時(shí)間和長(zhǎng)熒光半衰期的稀土離子做標(biāo)記物的優(yōu)勢(shì)，可消除基質(zhì)干擾和降低背景干擾，有效提升檢測(cè)靈敏度，利用偶連白細(xì)胞介素-6抗體特異性抗體的羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球，提高了標(biāo)記物的穩(wěn)定性，此外利用羧基修飾時(shí)間分辨熒光微球與鏈霉親和素做修飾手臂，更易與生物素化的抗體結(jié)合，由于鏈霉親和素上含有四個(gè)相同的可結(jié)合生物素的肽鏈，放大終反應(yīng)，提高了靈敏度；這種結(jié)合的親和常數(shù)百萬(wàn)倍于一般抗原抗體反應(yīng)，故使用本發(fā)明的白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑測(cè)定白細(xì)胞介素-6的準(zhǔn)確度和重復(fù)性得以提高；此外，這種結(jié)合具有高度的專一性，使得使用本發(fā)明的白細(xì)胞介素-6的檢測(cè)試劑檢測(cè)白細(xì)胞介素-6的選擇性得以提升。此外，使用本發(fā)明的白細(xì)胞介素-6檢測(cè)試劑檢測(cè)白細(xì)胞介素-6無(wú)須進(jìn)行檢測(cè)時(shí)需要水浴、分離等過(guò)程，也無(wú)須進(jìn)行檢測(cè)孵化、洗板和分離等過(guò)程，只需將樣品稀釋后滴入加樣孔，減少了處理步驟，操作更簡(jiǎn)單。

本發(fā)明中的羧基修飾的時(shí)間分辨熒光微球采用稀土離子作為標(biāo)記物，優(yōu)選地，采用具有較長(zhǎng)熒光半衰期的稀土離子作為標(biāo)記物，例如：Eu³⁺、Sm³⁺等。