[發明專利]一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法

在審

• 申請號: 202011100723.0
• 申請日: 2020-10-15
• 公開（公告）號: CN112220716A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 徐珒昭;孔祥麗;徐境含;武明月;劉旖旎;許曉曦
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: A61K8/9789
• 分類號: A61K8/9789;A61K8/73;A61K8/02;A61Q19/08;A61Q17/00;A61P39/06;A61P29/00;A61P17/16
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1.一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于包括如下步驟：

(1)菌種富集：首先將凍存的細菌纖維素產生菌活化，從-80℃冰箱中取出凍存管，37℃水浴加熱快速融化，在無菌條件下將好的接種到液體培養基中，搖床培養36-48h，進行活化處理；基礎培養基按重量百分比計由5-7％的酵母粉,10-15％的胰蛋白胨,0.1-0.5％的Na2HPO4,0.1-0.4％檸檬酸,0.75％的瓊脂和余量的去離子水組成。

其次進行菌種的傳代，經過活化的菌液取5％-10％到第二代液體培養基中，搖床培養24-36h，液體培養基除基礎培養基外添加3-5％蔗糖、1-1.5％海藻懸浮液或羧甲基纖維素；

最后進行菌液富集，取二代菌液3-5％到富集培養液中，該培養液除基礎培養基外包含1-3％蔗糖、0.1-0.4％醋酸鈉、1％海藻懸浮液，調節培養基在4.0-4.5之間，并且所有培養基經過121℃，15-20min滅菌處理。經過搖床培養36-72h，得到種子液；

(2)浸提將特級綠茶茶葉(普洱茶)超微粉碎，經過140-160目過篩處理，按重量份1：6-10的比例加入蒸餾水加熱并混合均勻，以10℃/min速度加熱至90℃，在90℃下進行浸提50-60min，然后擠壓過濾，濾渣用4～8倍重量的蒸餾水混合再次90℃下浸提50-60min，合并兩次濾液，得到綠茶浸出液；

(3)制備培養基稱取細菌纖維素發酵培養基組分28-30g后加入綠茶浸出液1L,混合均勻后118-121℃，15-20min滅菌；

(4)將5-8％種子液接入含有綠茶浸出液的發酵培養基中,搖勻后倒入模具中，靜置培養3-7d，在厚度達到1.5-1.75mm后停止發酵，取出發酵產物；

(5)取出發酵產物，裁剪成形，將所得細菌纖維素膜浸泡在弱堿性NaOH溶液中調節PH至6.8-7.0，然后用0.4-0.5％碳酸鈉溶液清洗掉醋酸味，再用雙蒸水洗凈(沖洗2-3次，每次2min)；

(6)將制備的綠茶纖維素膜121℃，15-20min滅菌，得到均勻負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜。

2.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟1和步驟4中,所述的培養溫度為26～32℃，160-200rpm搖床培養,種子液接入量為5％～8％。

3.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟1中,所述的細菌纖維素產生菌選擇醋酸菌屬如葡糖醋桿菌、熱帶醋酸菌、無色桿菌屬、產堿菌屬、氣桿菌屬和固氮菌屬中的一種或幾種。

4.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟1中培養基的蔗糖的添加量在3％-5％，1％-1.5％海藻懸浮液或羧甲基纖維素。

5.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟2中,所述的普洱茶與發酵培養基的水的質量比為1:9～24。

6.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟2中,所述浸提液提取之前的溫度控制由以10℃/min速度加熱至90℃。

7.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟4中,靜態培養時間可以是3～7天,根據所需復合材料厚度不同從而決定反應時間。

8.如權利要求1所述的一種負載綠茶活性物質的細菌纖維素面膜的制備方法，其特征在于：步驟4中,純化方法為將發酵產物在質量百分含量為2％的NaOH水溶液中,70～90℃的溫度下加熱1～4h,反復水洗至中性。