[發明專利]一種呼吸道感染病原體核酸聯合檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202011098442.6
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112280897A
• 公開（公告）日: 2021-01-29
• 發明（設計）人: 鄭江花;朱娟娟;李烈軍;謝龍旭
• 申請（專利權）人: 上海市浦東新區周浦醫院;廣州凱普醫藥科技有限公司;上海凱普醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/689;C12Q1/6837;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 孫鳳俠

1.一種呼吸道感染病原體核酸聯合檢測引物與探針組合，其特征在于，所述呼吸道感染病原體為新型冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體；所述引物與探針組合的序列分別如下：

(1)用于檢測新型冠狀病毒ORF1ab靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：1～3所示；

(2)用于檢測新型冠狀病毒核殼蛋白靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：4～6所示；

(3)用于檢測甲型流感病毒靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：7～9所示；

(4)用于檢測乙型流感病毒靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：10～12所示；

(5)用于檢測呼吸道合胞病毒靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQID NO：13～15所示；

(6)用于檢測人副流感病毒1型靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQID NO：16～18所示；

(7)用于檢測人副流感病毒2型靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQID NO：19～21所示；

(8)用于檢測人副流感病毒3型靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQID NO：22～24所示；

(9)用于檢測腺病毒靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：25～27所示；

(10)用于檢測肺炎支原體靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：28～30所示；

(11)用于檢測肺炎衣原體靶基因的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ IDNO：31～33所示；

(12)用于檢測內標基因B2M的上下游引物和探針，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO：34～36所示。

2.根據權利要求1所述的引物與探針組合，其特征在于，引物序列5’端標記生物素修飾，探針序列5’端標記氨基化修飾。

3.權利要求1或2所述引物與探針組合在制備呼吸道感染病原體核酸聯合檢測試劑盒中的應用。

4.一種呼吸道感染病原體核酸聯合檢測試劑盒，其特征在于，包括權利要求1或2所述的引物與探針組合。

5.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述呼吸道感染病原體包括新型冠狀病毒、甲型流感病毒、乙型流感病毒、呼吸道合胞病毒、人副流感病毒、腺病毒、肺炎支原體、肺炎衣原體。

6.根據權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，還包括PCR緩沖液、酶混合液、空白對照和陽性對照。

7.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述PCR緩沖液的組成為：26～30mol/LpH8.0 Tris-HCl，15～25mmol/L(NH₄)₂SO₄，28～32mmol/L KC1，3.5～4.5mmol/L MgCl₂，0.15～0.25mol/L dNTPs。

8.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述酶混合液包括熱啟動Taq酶、逆轉錄酶和尿嘧啶糖基化酶。

9.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述空白對照為滅菌的去離子水。

10.根據權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性對照包括陽性對照1和陽性對照2；所述陽性對照1包括新型冠狀病毒N靶基因質粒、新型冠狀病毒ORF 1ab靶基因質粒、乙型流感病毒基因質粒、人副流感病毒基因質粒和肺炎支原體基因質粒，質粒濃度均為1.0×10⁵copies/mL，以及內標B2M基因質粒，質粒濃度為1.0×10⁴copies/mL；所述陽性對照2包括甲型流感病毒基因質粒、呼吸道合胞病毒基因質粒、腺病毒基因質粒和肺炎衣原體基因質粒，質粒濃度均為1.0×10⁵copies/mL。