[發明專利]一種毒品原植物恰特草及其制品實時熒光PCR檢測引物、探針、方法和試劑盒

有效

• 申請號: 202011097678.8
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112195261B
• 公開（公告）日: 2022-09-16
• 發明（設計）人: 劉二龍;左然玲;盧麗;牟桂萍;李志勇;王毅謙;高秀潔;鄭冠津;華展義
• 申請（專利權）人: 黃埔海關技術中心
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12Q1/686;C12Q1/6851;C12N15/11
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 陳潔娣;劉明星

1.一種恰特草及其制品實時熒光PCR檢測引物組，其特征在于，包括檢測引物和檢測探針，所述的檢測引物如下所示：

Catha134 -F：5'-AGGTGTGATAAAAATGAGTCCCAGTA-3'；

Catha134-R：5'-TTTGGCGAGGGACTGAATAATC-3'；

所述的檢測探針如下所示：

Catha134-P：5'-CTTTGACAAAAACCCTTAAA-3'，探針的5'端標記有熒光報告基團，3'端標記有熒光淬滅基團。

2.根據權利要求1所述的檢測引物組，其特征在于，所述的熒光報告基團為FAM，所述的熒光淬滅基團為MGB。

3.一種恰特草及其制品實時熒光PCR檢測試劑盒，包括實時熒光定量PCR反應液、耐熱DNA聚合酶、檢測引物和檢測探針，其特征在于，所述的檢測引物如下所示：

Catha134 -F：5'-AGGTGTGATAAAAATGAGTCCCAGTA-3'；

Catha134-R：5'-TTTGGCGAGGGACTGAATAATC-3'；

所述的檢測探針如下所示：

Catha134-P：5'-CTTTGACAAAAACCCTTAAA-3'，探針的5'端標記有熒光報告基團，3'端標記有熒光淬滅基團。

4.一種恰特草及其制品實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）提取樣品的基因組DNA作為模板；

（2）加入權利要求1所述的檢測引物和檢測探針，與實時熒光定量PCR反應液及耐熱DNA聚合酶混合形成擴增反應體系；

（3）將擴增反應體系在熒光PCR儀上進行實時熒光PCR反應，反應結束后，根據擴增曲線判斷樣品是否為恰特草或其制品。

5. 根據權利要求4所述的恰特草及其制品實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述的步驟（2）的擴增反應體系為：25 μL，包括Premix Ex Taq 12.5 μL，ROX Reference Dye II0.3 μL，10 μmol/L 檢測引物Catha134-F和Catha134-R各0.25 μL，10 μmol/L 檢測探針Catha134-P 0.25 μL，DNA 模板2 μL和ddH₂O 9.45 μL。

6. 根據權利要求4所述的恰特草及其制品實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述的步驟（3）的實時熒光PCR反應，其反應程序為95℃ 30 s；95℃ 5 s、60℃ 34 s，40個循環，于60℃收集熒光信號。

7.根據權利要求4所述的恰特草及其制品實時熒光PCR檢測方法，其特征在于，所述的步驟（3）的根據擴增曲線判斷樣品是否為恰特草或其制品的標準為：在陽性對照、陰性對照和空白對照結果均正常的情況下，被檢樣品進行檢測時：如果有典型熒光擴增曲線，Ct值≤38.0，則判定樣品為恰特草或其制品；如果Ct值＞38.0或無Ct值，則判定樣品不是恰特草或其制品。

8.權利要求1所述的檢測引物組在制備檢測恰特草及其制品的試劑盒中的應用。

9.權利要求3所述的檢測試劑盒在鑒別恰特草及其制品中的應用。