[發明專利]一種肝細胞培養基、培養方法及其用途

有效

• 申請號: 202011097462.1
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112094803B
• 公開（公告）日: 2022-08-02
• 發明（設計）人: 黃鵬羽;毛一雷;莊緒冉;劉俊來;彭文博
• 申請（專利權）人: 上海科技大學;中國醫學科學院北京協和醫院
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071
• 代理公司: 上海光華專利事務所(普通合伙) 31219
• 代理人: 許亦琳;余明偉

1.一種肝細胞培養基，其特征在于，所述肝細胞培養基培養的肝細胞不表達CK19，所述肝細胞培養基包括增殖培養基，所述增殖培養基以增殖培養基總量為基礎計，由以下成分組成：

液體基礎培養基

半乳糖 0.2 ~ 2 g/L；

胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉 液體基礎培養基體積的0.1%~10%；

脯氨酸 0.1 ~ 10 g/L；

煙酰胺 0.1 ~ 10 g/L；

鳥氨酸 0.01 ~ 1 g/L；

轉化生長因子α 0.1~100 ng/mL；

表皮生長因子 0.1~100 ng/mL；

地塞米松 10 nM ~ 10 μM；

Y-27632 0.1~100 μM；

A-83-01 0.01~10 μM；

CHIR99021 0.1~100 μM；

所述肝細胞培養基還包括成熟培養基，所述成熟培養基以成熟培養基的總量為基礎計，由以下成分組成：

液體基礎培養基

半乳糖 0.2 ~ 2 g/L；

胰島素-轉鐵蛋白-亞硒酸鈉 液體基礎培養基體積的0.1% ~ 10%；

脯氨酸 0.1 ~ 10 g/L；

煙酰胺 0.1 ~ 10 g/L；

鳥氨酸 0.01 ~ 1 g/L；

轉化生長因子α 0.1~100 ng/mL；

表皮生長因子 0.1 ~ 100 ng/mL；

地塞米松 10 nM ~ 10 μM；

抑瘤素-M 0.1~100 ng/mL；

腺苷酸環化酶激活劑 0.1 ~100 μM；

所述腺苷酸環化酶激活劑為弗斯可林。

2.根據權利要求1所述的肝細胞培養基，其特征在于，所述弗斯可林的濃度為0.1 μM -100 μM。

3.根據權利要求1所述的肝細胞培養基，其特征在于，所述弗斯可林的濃度為1~50 μM。

4.根據權利要求1所述的肝細胞培養基，其特征在于，所述液體基礎培養基為MEM、DMEM、DMEM/F12、RPMI1640、F12中的一種或幾種。

5.根據權利要求1所述的肝細胞培養基，其特征在于，還包括以下項中的一種或幾種：

所述半乳糖的濃度為1.0 ~ 2.0g/L；

所述脯氨酸的濃度為：0.1 ~ 1.0 g/L；

所述鳥氨酸的濃度為：0.01~0.3 g/L；

所述煙酰胺的濃度為：0.4~0.8 g/L；

所述轉化生長因子α的濃度為10~80 ng/mL。