[發明專利]一種用于早期檢測動脈粥樣硬化的診斷試劑

有效

• 申請號: 202011096838.7
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112285362B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 王愷;丁丹;孔德領;王婷;米杏研;高賀麒
• 申請（專利權）人: 南開大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/58;G01N33/543;G01N33/533;C07D417/06;C09K11/06
• 代理公司: 北京睿智保誠專利代理事務所(普通合伙) 11732
• 代理人: 王燦

1.一種用于早期檢測動脈粥樣硬化的診斷試劑，其特征在于：以具有聚集誘導發光性質的熒光小分子/聚合物為母核，以表面活性劑為載體制備納米粒子，再通過化學合成法在納米粒表面連接Anti-CD47抗體，制備Anti-CD47抗體修飾的熒光納米探針；制備的所述Anti-CD47抗體修飾的熒光納米探針用于早期檢測動脈粥樣硬化；

以化合物5為所述熒光小分子/聚合物；

所述的熒光小分子/聚合物具有AIE聚集誘導發光性質；

所述診斷試劑制備方法包括如下步驟：

步驟一，納米粒的制備：將適量所述的AIE小分子/聚合物與PEG-DSPE-COOH 2000，溶解于適量THF中，得混合溶液備用；

在細胞破碎儀中取適量上述混合溶液逐滴緩慢滴入到適量去離子水中，超聲處理，得納米粒子溶液；用氮氣單口吹以蒸發溶劑，一定時間后得到目標納米粒子備用；

步驟二，在剩余液體中依次加入適量1-乙基-3(3-二甲基丙胺)碳二亞胺(EDCI)、N-羥基琥珀酰亞胺磺酸鈉鹽，室溫下反應；再加入Anti-CD47抗體適量，4℃下反應8小時，得修飾的熒光納米探針；將上述的納米粒子用透析袋進行透析，期間每隔2-3小時更換去離子水，換水頻率約為3-4次；用去離子水將溶液定容，即可制備成Anti-CD47抗體修飾的熒光納米探針；

所述熒光小分子/聚合物的制備方法包括如下步驟：

步驟一，4，4'-(2-(4-溴苯基)-2-苯基乙烯-1，1-二基)雙(甲氧基苯)的制備：將鋅粉置于適量的超干四氫呋喃溶液中，0℃下滴加四氯化鈦，升溫至70℃反應3小時，再降溫至0℃，滴加吡啶后滴加溶于適量超干四氫呋喃溶液的4-溴苯甲酰苯與4，4'-二羥基二苯甲酮再升溫至70℃反應12小時，反應結束后，加入飽和碳酸氫鈉溶液淬滅，用乙酸乙酯萃取有機層，合并有機相，以乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑，經硅膠柱層析純化，得到4，4'-(2-(4-溴苯基)-2-苯基乙烯-1，1-二基)二酚，記為化合物1；將化合物1與碳酸鈉溶于適量丙酮溶液中，再加入CH3I，40℃反應12小時后，以乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑，經硅膠柱層析純化，得到4，4'-(2-(4-溴苯基)-2-苯基乙烯-1，1-二基)雙(甲氧基苯)，記為化合物2；

步驟二，2-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼烷的制備：將適量化合物2與雙(頻哪醇合)二硼，[1，1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀，醋酸鉀溶于適量甲苯溶液，回流反應12小時，反應完畢后，以乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑進行硅膠柱層層析純化，得到2-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧雜硼烷，記為化合物3；

步驟三，5-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)噻吩-2-甲醛的制備：將化合物3，5-溴-2-噻吩甲醛，四(三苯基膦)鈀，四丁基溴化銨置于適量甲苯中后，往反應體系中加入適量2mol/L的碳酸鉀水溶液，回流反應12小時，反應完畢后使用乙酸乙酯萃取，合并有機相，以乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑，硅膠柱層析純化粗品，得5-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)噻吩-2-甲醛，記為化合物4；

步驟四，5-((5-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)噻吩-2-基)亞甲基)-3-乙基-2-硫代噻唑烷的制備：將適量化合物4、3-乙基-2-硫代噻唑啉酮-4-酮、醋酸銨置于一定量醋酸中，回流反應12小時，用飽和鹽水萃取有機層，合并有機相，以乙酸乙酯/石油醚為洗脫劑，經硅膠柱層析純化，得到5-((5-(4-(2，2-雙(4-甲氧基苯基)-1-苯基乙烯基)苯基)噻吩-2-基)亞甲基)-3-乙基-2-硫代噻唑烷，記為化合物5；

所述表面活性劑為PEG-DSPE-COOH 2000。

2.根據權利要求1所述的診斷試劑，其特征在于，所述熒光小分子/聚合物具有聚集誘導發光性質。

3.根據權利要求1所述的診斷試劑，其特征在于，所述診斷試劑用于在動脈粥樣硬化的早期對其進行精準的特異性檢測。