[發明專利]6-羥基硫酸褪黑素衍生物及其免疫原、特異性抗體的制備方法和應用

在審

• 申請號: 202011096209.4
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112225795A
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 張小可;徐琦鋆;何秀麗;陸麗華
• 申請（專利權）人: 湖南蘇陽醫療科技有限公司
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K1/107;C07K16/44;G01N33/53;G01N33/58;G01N33/68;G01N33/543;C07D209/14
• 代理公司: 蘇州知途知識產權代理事務所(普通合伙) 32299
• 代理人: 孫占莉

本發明提供了一種6?羥基硫酸褪黑素衍生物及其免疫原、特異性抗體的制備方法和應用，本發明還提供了6?羥基硫酸褪黑素免疫檢測試劑。具體的，將結構新穎的6?羥基硫酸褪黑素衍生物與經過基因工程改造得到的重組牛血清白蛋白偶聯制得6?羥基硫酸褪黑素人工抗原，再用6?羥基硫酸褪黑素人工抗原免疫實驗動物獲得抗6?羥基硫酸褪黑素特異性抗體，經檢測表明，本發明提供的特異性抗體的特異性強、靈敏度高，與常見的30種激素無任何交叉反應；所制備的6?羥基硫酸褪黑素免疫檢測試劑，可以實現在全自動生化分析儀上對6?羥基硫酸褪黑素的高通量、快速化檢測。

技術領域

本發明屬于生物醫學檢測技術領域，具體涉及一種6-羥基硫酸褪黑素衍生物及其免疫原、特異性抗體的制備方法和應用，還涉及6-羥基硫酸褪黑素免疫檢測試劑。

背景技術

孤獨癥譜系障礙(autism spectrum disorders，ASD)是一種起病于嬰幼兒期的神經發育障礙性疾病，患病率呈逐年上升趨勢，該病以社會溝通與交往障礙，局限的、重復的刻板行為，狹窄的興趣或活動為核心癥狀。近年來ASD患兒所伴有的臨床相關問題引起關注，特別是睡眠問題，有研究報道ASD患兒常伴睡眠-覺醒障礙問題，其中失眠最為常見，以入睡困難，睡眠持續時間短和夜醒次數多等癥狀為主，這可能是由于ASD患兒體內調節晝夜生物節律的下丘腦-垂體-腎上腺軸功能紊亂，引起相關神經遞質代謝通路異常而導致的。研究發現ASD患兒體內對晝夜生理節律及睡眠-覺醒節律的調節發揮重要作用的褪黑激素及其代謝產物6-羥基硫酸褪黑素(6-sulfatoxymelatonin，6-SM)的水平偏低。褪黑激素是一種重要的神經內分泌激素，對機體早期神經發育、睡眠-覺醒節律、氧化應激等生理機能發揮重要作用，其合成受光周期和位于下丘腦視交叉上核生物鐘的調控，呈晝夜和季節性的變化規律，褪黑激素的分泌量在凌晨兩點左右達到高峰，褪黑激素的主要代謝產物6-SM隨尿液排出，其化學性質十分穩定，尿液中6-SM的水平可以代表血液中褪黑激素的水平。研究發現ASD患兒晨尿中6-SM的水平明顯低于健康兒童對照組。進一步研究發現ASD患兒的6-SM水平與睡眠問題的嚴重程度呈明顯負相關，即6-SM水平越低，ASD患兒存在的睡眠問題就越嚴重，這表明ASD患兒睡眠問題可能與其體內褪黑激素的分泌量減少有關。因此，對ASD患兒尿液中的6-SM水平進行檢測與監控，對于提高ASD患兒的治療與康復效果具有重要的臨床意義。

檢測6-羥基硫酸褪黑素的實驗室方法有比色法、放射免疫分析法、高效液相色譜法、液相串聯質譜法、酶聯免疫吸附測定法、免疫比濁法等。比色法檢測的是褪黑激素與6-羥基硫酸褪黑素等物質的總和而非單一化合物水平；放射免疫分析法穩定性較差，且存在放射線輻射和污染等問題；高效液相色譜法前處理復雜，要求目標分析物在色譜上被完全分離，因此分析時間較長；液相串聯質譜法檢測靈敏度高，快速，但結構復雜，維護成本高，需經過專門培訓的技術人員操作，不易在基層醫療機構普及；酶聯免疫吸附測定法靈敏度高，特異性好，但檢測時間長，準確度差，難以用于批量檢測。

因此，目前市面上缺乏線性范圍寬、靈敏度高、準確度高、精密度高，檢測時間短，樣品處理簡單，儀器自動化程度高，可多樣本連續檢測的6-羥基硫酸褪黑素檢測產品。

發明內容

為了克服現有技術的不足，本發明的第一個目的在于提供一種6-羥基硫酸褪黑素衍生物，該衍生物為新合成的化合物，自然界中不存在。

本發明的第一個目的采用以下技術方案實現：一種6-羥基硫酸褪黑素衍生物，其結構式如式Ⅰ所示：

本發明的第二個目的在于提供一種如上所述的6-羥基硫酸褪黑素衍生物的制備方法，該制備方法不同于常規制備方法，具有良好的合成效果，顯著提高了6-羥基硫酸褪黑素衍生物的合成效率。

本發明的第二個目的采用以下技術方案實現：一種如結構式I所示的6-羥基硫酸褪黑素衍生物的制備方法，包括以下步驟：

(1)將化合物1與氯甲酸乙在堿性條件下酯反應，得到化合物2：