[發(fā)明專利]一種補(bǔ)腎活血方化學(xué)成分的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011094756.9
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號(hào): CN112098563B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 朱立國
• 申請（專利權(quán)）人: 中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院（中國中醫(yī)科學(xué)院骨傷科研究所）
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 趙琪

本發(fā)明提供了一種補(bǔ)腎活血方化學(xué)成分的檢測方法，涉及中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明提供的檢測方法，包括以下步驟：將補(bǔ)腎活血方的中藥依次進(jìn)行水浸泡、提取、濃縮、乙醇萃取、靜置、離心分離、除去上清液中的乙醇、乙酸乙酯萃取、將所得水相進(jìn)行正丁醇萃取、濃縮所得水相，得到待測液，然后采用特定的檢測條件進(jìn)行UPLC?MS檢測，將所得檢測結(jié)果對照標(biāo)準(zhǔn)色譜圖和天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫，得到待測液中的化學(xué)成分。本發(fā)明提供的檢測方法能夠同時(shí)定性檢測出補(bǔ)腎活血方中的93種有效化學(xué)成分，操作簡單，為補(bǔ)腎活血方的藥用機(jī)理以及中藥單體治療下腰痛奠定了基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及中藥檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種補(bǔ)腎活血方化學(xué)成分的檢測方法。

背景技術(shù)

下腰痛是臨床常見病、多發(fā)病，其治療主要以手術(shù)和非甾體抗炎西藥為主，其中，手術(shù)治療易 發(fā)生創(chuàng)口感染、神經(jīng)損傷、硬膜外血腫等風(fēng)險(xiǎn)，非甾體抗炎西藥可產(chǎn)生消化道出血等副作用，且這兩種治療方案價(jià)格昂貴。

中藥治療能夠解決上述手術(shù)風(fēng)險(xiǎn)高、西藥副作用大、價(jià)格昂貴等問題。例如，展嘉文(展嘉文等.補(bǔ)腎活血方含藥血清對離體兔脊柱運(yùn)動(dòng)節(jié)段壓力退變模型的影響.中國骨傷,2018,31(7):627-634.)和朱立國(朱立國等.補(bǔ)腎活血方治療椎間盤源性腰痛的臨床觀察.世界中醫(yī)藥,2017,12(3):554-557.) 公開了一種補(bǔ)腎活血方，由杜仲、補(bǔ)骨脂、懷牛膝、丹參、威靈仙和木瓜組成，其中，杜仲15g、補(bǔ)骨脂10g、懷牛膝10g、丹參12g、威靈仙10g和木瓜9g，具有補(bǔ)腎強(qiáng)腰、活血化瘀之功效，該補(bǔ)腎活血方治療下腰痛總有效率為90.69％，并可有效改善患者VAS及ODI評(píng)分。

但目前對上述補(bǔ)腎活血方的藥用機(jī)理或其主要成分的研究尚不足。

發(fā)明內(nèi)容

鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種補(bǔ)腎活血方化學(xué)成分的檢測方法，本發(fā)明提供的檢測方法能夠檢測出補(bǔ)腎活血方中的主成分，操作簡單。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了一種補(bǔ)腎活血方化學(xué)成分的檢測方法，包括以下步驟：

(1)將補(bǔ)腎活血方的中藥置于水中浸泡后回流提取，得到水提取液；所述補(bǔ)腎活血方的中藥組分為杜仲、補(bǔ)骨脂、懷牛膝、丹參、威靈仙和木瓜；

(2)將所述水提取液依次進(jìn)行濃縮、乙醇萃取、靜置和離心分離，得到乙醇水上清液；除去所述乙醇水上清液中的乙醇，得到水萃取液；

(3)采用乙酸乙酯萃取所述水萃取液，得到第一水相；

(4)采用正丁醇萃取所述第一水相，得到第二水相；濃縮所述第二水相，得到待測液；

(5)采用高效液相色譜-質(zhì)譜法對所述待測液進(jìn)行檢測，將所得檢測結(jié)果對照標(biāo)準(zhǔn)色譜圖和天然產(chǎn)物數(shù)據(jù)庫，得到待測液中的化學(xué)成分；

所述高效液相色譜-質(zhì)譜法的高效液相色譜檢測條件為：

色譜柱：C₁₈色譜柱；

柱溫：30℃；

洗脫方式：梯度洗脫，流動(dòng)相A為0.1v/v％甲酸水溶液，流動(dòng)相B為 0.1v/v％甲酸乙腈溶液；所述流動(dòng)相A和流動(dòng)相B的流速為0.3mL/min；

檢測波長：190～500nm；

所述梯度洗脫的程序如下：

0～2min，所述流動(dòng)相A的體積百分含量為98％，所述流動(dòng)相B的體積百分含量為2％；

2～7min，所述流動(dòng)相A的體積百分含量由98％勻速降低到85％，所述流動(dòng)相B的體積百分含量為由2％勻速增加到15％；