[發明專利]一種補腎活血方化學成分的檢測方法

有效

• 申請號: 202011094756.9
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112098563B
• 公開（公告）日: 2022-07-15
• 發明（設計）人: 朱立國
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院望京醫院（中國中醫科學院骨傷科研究所）
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 趙琪

1.一種補腎活血方化學成分的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)將補腎活血方的中藥置于水中浸泡后回流提取，得到水提取液；所述補腎活血方的中藥組分為杜仲、補骨脂、懷牛膝、丹參、威靈仙和木瓜；

(2)將所述水提取液依次進行濃縮、乙醇萃取、靜置和離心分離，得到乙醇水上清液；除去所述乙醇水上清液中的乙醇，得到水萃取液；

(3)采用乙酸乙酯萃取所述水萃取液，得到第一水相；

(4)采用正丁醇萃取所述第一水相，得到第二水相；濃縮所述第二水相，得到待測液；

(5)采用高效液相色譜-質譜法對所述待測液進行檢測，將所得檢測結果對照標準色譜圖和天然產物數據庫，得到待測液中的化學成分；

所述高效液相色譜-質譜法的高效液相色譜檢測條件為：

色譜柱：C₁₈色譜柱；

柱溫：30℃；

洗脫方式：梯度洗脫，流動相A為0.1v/v％甲酸水溶液，流動相B為0.1v/v％甲酸乙腈溶液；所述流動相A和流動相B的流速為0.3mL/min；

檢測波長：190～500nm；

所述梯度洗脫的程序如下：

0～2min，所述流動相A的體積百分含量為98％，所述流動相B的體積百分含量為2％；

2～7min，所述流動相A的體積百分含量由98％勻速降低到85％，所述流動相B的體積百分含量為由2％勻速增加到15％；

7～14min，所述流動相A的體積百分含量由85％勻速降低到75％，所述流動相B的體積百分含量為由15％勻速增加到25％；

14～21min，所述流動相A的體積百分含量由75％勻速降低到70％，所述流動相B的體積百分含量為由25％勻速增加到30％；

21～25min，所述流動相A的體積百分含量由70％勻速降低到5％，所述流動相B的體積百分含量為由30％勻速增加到95％；

25～29min，所述流動相A的體積百分含量為5％，所述流動相B的體積百分含量為95％；

39～30min，所述流動相A的體積百分含量由5％勻速增加到98％，所述流動相B的體積百分含量由95％勻速降低到2％；

所述高效液相色譜-質譜法的質譜條件為：

離子源：ESI離子源；

離子源溫度：150℃；

掃描方式：正負離子掃描；

掃描范圍：50～1200Da；

載氣：氮氣；

脫溶劑氣：氮氣；

脫溶劑氣溫度：450℃；

脫溶劑氣流量：800L/h；

錐孔氣流量：50L/h；

錐孔電壓：40V；

毛細管電壓：1000V；

碰撞誘導解離氣體：氬氣；

低碰撞能量：6eV；

高碰撞能：15～45eV。

2.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述補腎活血方的中藥組分和水的質量比為1：(7～9)。

3.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述浸泡的時間為8～12h。

4.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(1)中，所述回流提取的溫度為90～100℃，時間為1.5～3h。

5.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述乙醇萃取時加入乙醇后乙醇的體積分數為65～75％。

6.根據權利要求1或5所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(2)中，所述靜置的溫度為3～5℃，時間為23～25h。

7.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(3)中，所述水萃取液和乙酸乙酯的體積比為1：(6～8)。

8.根據權利要求1所述的的檢測方法，其特征在于，步驟(4)中，所述第一水相和正丁醇的體積比為1：(6～8)。