[發(fā)明專利]LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011094570.3
• 申請日: 2020-10-14
• 公開（公告）號: CN112195275A
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設計）人: 王云龍;王群智;邵俊影;王欣;林圣博;李強;王麗;王雯麗;王昱堃
• 申請（專利權）人: 河南智泰生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州先風知識產權代理有限公司 41127
• 代理人: 張鵬輝

1.LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組，其特征在于，包括：用于檢測甲型流感病毒的甲型流感病毒擴增引物、用于檢測乙型流感病毒的乙型流感病毒擴增引物及用于檢測新型冠狀病毒的2019-nCOV病毒擴增引物組，甲型流感病毒擴增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:8所示，乙型流感病毒擴增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示，2019-nCOV病毒擴增引物組由N基因擴增引物和ORF1ab基因擴增引物中的一組或兩組組成，N基因引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:18所示，ORF1ab基因引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:19～SEQ ID NO:22所示。

2.LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組。

3.根據權利要求2所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所示甲型流感病毒擴增引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例為0.5:0.5:4:4，乙型流感病毒擴增引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例為0.5:0.5:4:4，N基因引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP的加入量比例為0.5:0.5:1:1:4:4，ORF1ab基因引物的F3、B3、FIP、BIP的加入量比例為0.5:0.5:4:4。

4.根據權利要求2或3所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，還包括內參基因及用于檢測內參基因的內參基因擴增引物。

5.根據權利要求4所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所述內參基因為人源CALR基因，人源CALR基因序列如SEQ ID NO:23所示；內參基因擴增引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:24～SEQ ID NO:29所示。

6.根據權利要求4所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，還包括分別與甲型流感病毒擴增引物、乙型流感病毒擴增引物、N基因擴增引物、ORF1ab基因擴增引物、內參基因擴增引物對應的五組反應體系，每組反應體系均包括相應的緩沖液、MgSO₄、Betaine、dNTPS、dUTP、顯色劑、Bst DNA聚合酶、UNG酶以及逆轉錄酶。

7.根據權利要求6所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，每組所述反應體系的體積為23ul，包括以下各物質：2.5ul的緩沖液、0.75～1.5ul的MgSO₄、2～4ul的Betaine、2.5～3.75ul的dNTPS、1ul的dUTP、0.5ul的顯色劑、1ul的Bst DNA聚合酶、0.125ul的UNG酶以及0.1ul的逆轉錄酶，還包括以下各引物：0.5ul的F3、0.5ul的B3、0或1ul的LF、0或1ul的LB、4ul的FIP、4ul的BIP。

8.LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取純化樣品的核酸；

2)配制如權利要求2中試劑盒中的LAMP反應體系，進行環(huán)介導等溫擴增反應；

3)結果判斷。

9.根據權利要求8所述的LAMP聯(lián)合檢測甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的方法，其特征在于，擴增條件為60～65℃，30～60min，30～60s收集一次信號。