[發(fā)明專利]LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組、試劑盒及方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011094570.3
• 申請(qǐng)日: 2020-10-14
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112195275A
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-08
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王云龍;王群智;邵俊影;王欣;林圣博;李強(qiáng);王麗;王雯麗;王昱堃
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南智泰生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 鄭州先風(fēng)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 41127
• 代理人: 張鵬輝

本發(fā)明涉及一種LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組、試劑盒以及方法，引物組包括：甲型流感病毒擴(kuò)增引物、乙型流感病毒擴(kuò)增引物及2019?nCOV病毒擴(kuò)增引物組，甲型流感病毒擴(kuò)增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:5～SEQ ID NO:8所示，乙型流感病毒擴(kuò)增引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:9～SEQ ID NO:12所示，2019?nCOV病毒擴(kuò)增引物組由N基因擴(kuò)增引物和ORF1ab基因擴(kuò)增引物中的一組或兩組組成，N基因引物的F3、B3、LF、LB、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:13～SEQ ID NO:18所示，ORF1ab基因引物的F3、B3、FIP、BIP序列依次如SEQ ID NO:19～SEQ ID NO:22所示。操作簡(jiǎn)便，適應(yīng)性好，單次檢測(cè)可在1h內(nèi)鑒定樣本中是否存在甲型流感病毒、乙型流感病毒、2019?nCOV病毒。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于核酸檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組、試劑盒及方法。

背景技術(shù)

流行性感冒病毒(Influenza virus)屬于正粘病毒科(Orthomyxoviridae)，簡(jiǎn)稱流感病毒，包括人流感病毒和動(dòng)物流感病毒，人流感病毒分為甲(A)、乙(B)、丙(C)三型，是流行性感冒的病原體。其中甲型流感病毒可自然感染人和多種動(dòng)物，常突然發(fā)生、傳播迅速，多次引起世界性大流行。乙型流感病毒在自然情況下僅感染人，一般呈散發(fā)、爆發(fā)或小流行。

2019-nCOV屬于冠狀病毒科冠狀病毒屬，甲型流感、乙型流感和新型冠狀病毒2019-nCoV 均為單鏈RNA病毒，在入侵人體后通過(guò)自身編碼的RNA依賴RNA聚合酶RDRP直接進(jìn)行 RNA復(fù)制并大量擴(kuò)增。病毒病原體能刺激免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生因子風(fēng)暴，引起機(jī)體器官損害。病毒能引發(fā)呼吸道感染，出現(xiàn)發(fā)燒、咳嗽等相似癥狀，并且能通過(guò)空氣飛沫等途徑在人群中造成大面積傳播。三者早期癥狀并不容易區(qū)分。因此，在有以上癥狀的患者中，若能通過(guò)核酸檢測(cè)手段鑒別三個(gè)不同病原體，對(duì)于疾病控制，人民生命健康安全的保障具有重要意義。

傳統(tǒng)的流感病毒和人冠狀病毒的檢測(cè)方法較多，但一般都存在一些缺陷，其中血清學(xué)檢測(cè)、抗原檢測(cè)檢測(cè)時(shí)間短，要求低，但靈敏度不高同時(shí)容易造成假陽(yáng)性，病毒分離和電鏡檢測(cè)耗時(shí)長(zhǎng)，方法復(fù)雜，需要大型儀器及專業(yè)實(shí)驗(yàn)室，分子生物學(xué)檢測(cè)是目前靈敏度較高的一種檢測(cè)方法，針對(duì)上述三種病原的核酸檢測(cè)主要有熒光定量PCR法、環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法、基于重組酶介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法等，其中熒光定量PCR法檢測(cè)通道多通量高，但需要依托熒光定量 PCR儀及專業(yè)實(shí)驗(yàn)室和檢測(cè)人員，成本高，不利于推廣。環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法在恒定溫度下能高效擴(kuò)增核酸，擺脫了熱循環(huán)的限制。

現(xiàn)有技術(shù)中，申請(qǐng)公布號(hào)為CN111057798A的發(fā)明專利，公開(kāi)了一種檢測(cè)新型冠狀病毒的LAMP引物組合和試劑盒，同時(shí)公開(kāi)了利用引物組和以及引物組使用環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增方法檢測(cè)新冠病毒的方法，但是無(wú)法同時(shí)檢測(cè)甲型流感、乙型流感和新型冠狀病毒2019-nCoV。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的引物組，使用該引物組可聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒，便于區(qū)分病人感染了何種病毒。

本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供一種LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的試劑盒。

本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種LAMP聯(lián)合檢測(cè)甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的方法。

為了實(shí)現(xiàn)以上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：