[發(fā)明專利]血小板抗人球蛋白實驗免疫區(qū)帶分布檢測方法

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• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112379100A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 段生寶;李勇;陳維佳;馮立崗;丁少華;王紅梅;謝勁松;王玉玨;陳曄洲;魏雙施;田晶晶;劉杰;王澤龍;劉永茂;隋金晶;冷向武;張妍
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院蘇州生物醫(yī)學(xué)工程技術(shù)研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京遠(yuǎn)大卓悅知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11369
• 代理人: 孔凡玲

本發(fā)明公開了一種血小板抗人球蛋白實驗免疫區(qū)帶分布檢測方法，其采用免疫標(biāo)記抗人球蛋白實驗，通過免疫標(biāo)記物包括但不限于放射性同位素、膠體金、熒光素、量子點、化學(xué)(或生物)發(fā)光劑指示或有機(jī)染料等標(biāo)記抗人球蛋白試劑，然后與血小板特異性抗體反應(yīng)結(jié)合，并通過離心進(jìn)入?yún)^(qū)帶分布檢測卡中，呈現(xiàn)不同的區(qū)帶分布，從而判定檢測結(jié)果。本發(fā)明方法操作簡單、結(jié)果直觀可靠、成本低廉而結(jié)果準(zhǔn)確，可滿足臨床常規(guī)血小板抗體檢測的需求，輔助臨床血小板相關(guān)免疫性疾病的診斷，以及進(jìn)行輸血前相容性實驗檢測，減少血小板輸注無效癥的發(fā)生及其引起的出血及死亡病例，保障臨床安全、有效、科學(xué)的血小板輸血，同時還可節(jié)約寶貴的血小板資源。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫學(xué)和醫(yī)學(xué)檢驗領(lǐng)域，特別涉及一種血小板抗人球蛋白實驗免疫區(qū)帶分布檢測方法。

背景技術(shù)

血小板表面具有復(fù)雜的血型抗原，包括ABO抗原、HLA-I抗原及血小板特異性HPA抗原、CD36抗原，這些抗原均可以刺激機(jī)體產(chǎn)生血小板抗體。血小板抗體可引起患者發(fā)生血小板免疫損傷，產(chǎn)生免疫性血小板減少，如血小板輸注無效、輸血后紫癜、自身免疫性血小板減少癥，以及新生兒血小板減少癥等。特別是抗血小板CD36特異性抗體，在我國臨床血小板免疫性疾病的發(fā)生過程中具有重要意義。

血小板輸血是目前血小板減少癥和多種疾病的最主要治療手段之一。大量研究結(jié)果表明，患者輸注血小板前進(jìn)行抗體檢測和交叉配型以篩選相容性的血小板進(jìn)行輸注，輸血有效率大于70％，而僅ABO血型相同的隨機(jī)輸注血小板有效率低于30％。這不僅僅浪費了寶貴的血液資源，而且不相容血小板使患者體內(nèi)生成血小板抗體，導(dǎo)致免疫反應(yīng)，造成輸血無效，患者也幾乎無例外地病情加重，特別是對于長期依賴血小板輸注的血液病患者，往往導(dǎo)致體內(nèi)產(chǎn)生高效價的血小板抗體，出血癥狀得不到改善乃至病情加重。

要準(zhǔn)確、高效率、及時地診斷血小板相關(guān)免疫性疾病和輸血治療，理論上都必須進(jìn)行血小板抗體檢測和交叉配血。目前國際上血小板抗體分析的金標(biāo)準(zhǔn)方法“單克隆抗體固著血小板抗原分析技術(shù)(The monoclonal antibody immobilization of plateletantigen assay,MAIPA)”實驗程序繁雜，操作時間長至5小時以上，同時對實驗操作人員技術(shù)要求高，不能應(yīng)用于臨床常規(guī)檢測應(yīng)用。

抗人球蛋白實驗是檢測紅細(xì)胞血型不完全抗體的經(jīng)典方法，但未能有效應(yīng)用于血小板抗體檢測，主要原因在于紅細(xì)胞呈現(xiàn)肉眼可見紅色，形態(tài)規(guī)則，大小較均勻，凝集與非凝集易于判定。而血小板本身無顏色，形態(tài)不規(guī)則，大小分布不均勻，并且容易被激活聚集，難以通過凝集方法檢測抗體。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于針對上述現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種血小板抗人球蛋白實驗免疫區(qū)帶分布檢測方法，該方法將經(jīng)典的抗人球蛋白實驗技術(shù)和創(chuàng)新的免疫標(biāo)記區(qū)帶分布技術(shù)相結(jié)合，操作簡便、準(zhǔn)確性高。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種血小板抗人球蛋白實驗免疫區(qū)帶分布檢測方法，包括以下步驟：

1)制備抗人球蛋白，并采用免疫標(biāo)記物標(biāo)記得到免疫標(biāo)記抗人球蛋白；

2)制備血小板懸液；

3)預(yù)先在區(qū)帶分布檢測卡的反應(yīng)腔中加入免疫復(fù)合物分離增強介質(zhì)，以在所述區(qū)帶分布檢測卡的分離柱中形成免疫復(fù)合物分離增強介質(zhì)區(qū)域；

4)將待測樣品與所述步驟2)制得的血小板懸液進(jìn)行孵育反應(yīng)，分離后將得到的反應(yīng)產(chǎn)物與所述步驟1)制得的免疫標(biāo)記抗人球蛋白加入所述步驟3)獲得的區(qū)帶分布檢測卡的反應(yīng)腔中反應(yīng)，離心；

5)觀察所述區(qū)帶分布檢測卡的檢測窗，判定檢測結(jié)果；

其中，血小板與待測樣品孵育、分離后在所述區(qū)帶分布檢測卡的反應(yīng)腔內(nèi)與免疫標(biāo)記抗人球蛋白反應(yīng)，反應(yīng)產(chǎn)物通過離心進(jìn)入所述免疫復(fù)合物分離增強介質(zhì)區(qū)域并呈現(xiàn)不同的區(qū)帶分布：