[發明專利]血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法

在審

• 申請號: 202011088787.3
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112379100A
• 公開（公告）日: 2021-02-19
• 發明（設計）人: 段生寶;李勇;陳維佳;馮立崗;丁少華;王紅梅;謝勁松;王玉玨;陳曄洲;魏雙施;田晶晶;劉杰;王澤龍;劉永茂;隋金晶;冷向武;張妍
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘇州生物醫學工程技術研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 北京遠大卓悅知識產權代理有限公司 11369
• 代理人: 孔凡玲

1.一種血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)制備抗人球蛋白，并采用免疫標記物標記得到免疫標記抗人球蛋白；

2)制備血小板懸液；

3)預先在區帶分布檢測卡的反應腔中加入免疫復合物分離增強介質，以在所述區帶分布檢測卡的分離柱中形成免疫復合物分離增強介質區域；

4)將待測樣品與所述步驟2)制得的血小板懸液進行孵育反應，分離后將得到的反應產物與所述步驟1)制得的免疫標記抗人球蛋白加入所述步驟3)獲得的區帶分布檢測卡的反應腔中反應，離心；

5)觀察所述區帶分布檢測卡的檢測窗，判定檢測結果；

其中，血小板與待測樣品孵育、分離后在所述區帶分布檢測卡的反應腔內與免疫標記抗人球蛋白反應，反應產物通過離心進入所述免疫復合物分離增強介質區域并呈現不同的區帶分布：

陽性反應中血小板與相應抗體結合，然后經免疫標記抗人球蛋白橋連結合，形成顆粒型免疫復合物，穿過所述免疫復合物分離增強介質區域分布于所述檢測窗下沿；

陰性反應中血小板未能與免疫標記抗人球蛋白結合，血小板與免疫標記抗人球蛋白不能穿過所述免疫復合物分離增強介質區域，仍分布于所述分離柱內；

從而通過所述檢測窗內是否存在免疫標記物來判定檢測結果。

2.根據權利要求1所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述抗人球蛋白為羊抗人球蛋白、兔抗人球蛋白、雞抗人球蛋白、鼠抗人球蛋白單克隆抗體中的一種。

3.根據權利要求1所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述免疫標記物為膠體金、熒光素、量子點、放射性同位素、化學或生物發光劑、有機染料中的一種。

4.根據權利要求1所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述免疫復合物分離增強介質包括聚蔗糖-泛影葡胺混合物、二抗溶液，所述免疫復合物分離增強介質的比重為1.05～1.10，滲透壓為280～350mmol/L。

5.根據權利要求4所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述二抗為羊抗人IgG、兔抗人IgG、鼠抗人IgG單克隆抗體或雞抗人IgG抗體。

6.根據權利要求1所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述步驟4)具體為：將待測樣品、血小板懸液、低離子強度溶液加入EP管中，振蕩混勻后，37℃下進行孵育反應；離心，棄上清，用含1％BSA的PBS重懸；將得到的血小板重懸液加入所述區帶分布檢測卡反應腔中，再加入免疫標記抗人球蛋白，37℃下進行孵育反應，離心。

7.根據權利要求1-6中任意一項所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述區帶分布檢測卡為4聯～8聯微柱卡，所述區帶分布檢測卡上的每個微柱均包括由上至下依次連通設置的反應腔、分離柱和檢測窗。

8.根據權利要求7所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述檢測窗通過直徑為0.1～0.5mm的管道與所述分離柱相連，所述檢測窗的厚度為0.2～1mm，所述檢測窗的平面形態為長方形、正方形或扇形。

9.根據權利要求8所述的血小板抗人球蛋白實驗免疫區帶分布檢測方法，其特征在于，所述區帶分布檢測卡的材質為聚乙烯、聚丙烯、聚苯乙烯、聚對苯二甲酸乙二酯或ABS塑料。