[發明專利]一種脂蛋白a檢測試劑盒及檢測方法

有效

• 申請號: 202011087841.2
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112255421B
• 公開（公告）日: 2021-07-23
• 發明（設計）人: 姚曉娟;黎法颶
• 申請（專利權）人: 北京永基恒聲科技有限公司
• 主分類號: G01N33/92
• 分類號: G01N33/92;G01N33/577;G01N33/543
• 代理公司: 濰坊諾誠智匯知識產權代理事務所(普通合伙) 37309
• 代理人: 榮曉宇

本發明公開了一種脂蛋白a檢測試劑盒及檢測方法，該試劑盒包括試劑R1、試劑R2和校準品，其特征在于，所述的試劑R1包括第一緩沖液50～250mmol/L、抗干擾劑1～2wt％、促進劑1～2.5wt％、防腐劑0.01～0.1wt％；所述的試劑R2包括第二緩沖液50～250mmol/L、穩定劑0.5～5wt％、抗人脂蛋白a單克隆抗體包被膠乳顆粒0.1～2g/L、防腐劑0.02～0.2wt％。采用本發明的檢測試劑盒可以消除疏水作用、補體、類風濕性因子等因素引致的非特異性干擾的問題，具有抗干擾能力強、特異性高、準確度高、穩定性好等優點，并且操作方便、便于推廣應用。

技術領域

本發明涉及體外診斷試劑技術領域，具體涉及一種脂蛋白a檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

脂蛋白(a)即lipoprotein(a)，是一種由肝臟合成的富含膽固醇的特殊大分子脂蛋白，它由一個脂質核心、apoB-100分子、以及其外圍的親水性的apo(a)三部分組成。主要在肝臟合成后分泌入血，在致動脈粥樣硬化過程中起著極其重要的作用。脂蛋白(a)與冠心病、鈣化性主動脈瓣狹窄、家族性高膽固醇血癥、外周血管疾病等密切相關，并已成為公認的冠心病獨立預測因子。

目前，已知的檢測脂蛋白(a)濃度的方法有酶聯免疫吸附法，放射免疫法，免疫比濁法等檢測方法，這些方法均存在一定的缺點。如：放射免疫法有放射性污染；酶聯免疫吸附法操作復雜、耗時長，對操作者有一定的技能要求；免疫比濁法與纖溶酶原有交叉污染，因此測定的準確度也就比較低，需要進行改進。膠乳顆粒增強免疫比濁法是近年來出現的一種較為穩定、準確的體液蛋白均相免疫比濁檢測方法，其原理是：在高分子膠乳微球的表面交聯單克隆或多克隆抗體，當交聯有抗體的微球與抗原結合后，在短時間內會迅速聚集在一起，改變了反應液的散光性能或透光性能，反應液透光性能(即吸光度)的改變與被測抗原的濃度有較強的相關性，在一定范圍內可以反映被測抗原的濃度。

研究表明，采用膠乳顆粒增強免疫比濁法進行檢測會受到多種因素的干擾而產生假陽性結果，如：1)反應環境中存在的疏水性物質會與抗原/抗體或膠乳通過疏水作用結合，導致膠乳顆粒增強免疫比濁法檢測脂蛋白(a)時產生假陽性；2)血清和組織液中的補體分子會與抗體的Fc段和C1q補體結合位點結合，而產生假陽性；3)血清中類風濕性因子與包被或標記的抗體的Fc段結合產生假陽性結果。

雖然現有技術針對脂蛋白(a)含量的檢測已經研發不少基于膠乳顆粒增強免疫比濁法原理的檢測試劑盒，如專利公開號為CN 103149370 A、CN106990234 A、CN 107607729A、CN 111239422 A、CN 109541241 A等中國發明專利，但上述的專利并沒有解決體外診斷試劑中疏水作用、補體、類風濕性因子等因素引致的非特異性干擾的問題。

另一方面，現有技術制備的抗體包被膠乳顆粒穩定性較差，將抗體偶聯至羧基的聚苯乙烯膠乳顆粒，即時檢測效果很好，但是置于37℃2天后，抗體活性下降較大，且膠乳發生凝集現象，導致試劑盒使用的重復性不好、變異系數增大，直接導致試劑檢測結果不準確，不能滿足使用要求。

發明內容

本發明的目的是提供一種脂蛋白a檢測試劑盒及檢測方法，采用該檢測試劑盒可以消除疏水作用、補體、類風濕性因子等因素引致的非特異性干擾的問題，具有抗干擾能力強、特異性高、準確度高、穩定性好等優點，并且操作方便、便于推廣應用。

本發明是通過以下技術方案予以實現的：

一種脂蛋白a檢測試劑盒，包括試劑R1、試劑R2和校準品，其特征在于，所述的試劑R1包括第一緩沖液50～250mmol/L、抗干擾劑1～2wt％、促進劑1～2.5wt％、防腐劑0.01～0.1wt％；所述的試劑R2包括第二緩沖液50～250mmol/L、穩定劑0.5～5wt％、抗人脂蛋白a單克隆抗體包被膠乳顆粒0.1～2g/L、防腐劑0.02～0.2wt％。