[發明專利]片段方式合成卡貝縮宮素的方法

有效

• 申請號: 202011087773.X
• 申請日: 2020-10-13
• 公開（公告）號: CN112142825B
• 公開（公告）日: 2022-03-11
• 發明（設計）人: 徐發往;李興臣;梁祺;李浩;師艷秋
• 申請（專利權）人: 山東辰龍藥業有限公司
• 主分類號: C07K7/16
• 分類號: C07K7/16;C07K1/08;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 濟寧匯景知識產權代理事務所(普通合伙) 37254
• 代理人: 朱培

1.片段方式合成卡貝縮宮素的方法，其特征包括以下步驟：

步驟（1）：片段Ⅰ〔Fmoc-Pro-Leu-Gly-NH2-Rink Amide-AM〕的合成：

將Fmoc保護的氨基樹脂加入DCM溶脹，過濾后得到的溶脹樹脂加入脫保護液脫去Fmoc基團，并加入洗滌液洗滌以后通過固相合成依次連接預處理活化的具有Fmoc保護的氨基酸Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH；

將具有Fmoc保護的氨基樹脂，去Fmoc保護后，依次與預處理活化的具有Fmoc保護基團的氨基酸Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH和Fmoc-Pro-OH通過固相合成的方式合成片段Ⅰ〔Fmoc-Pro-Leu-Gly-NH2-Rink Amide-AM〕；

步驟（2）：片段Ⅱ〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-CTC樹脂〕的合成：

①在氮氣保護下，將Fmoc-Cys-OH和4-溴丁酸乙酯加入反應溶劑中，后加入三乙胺、LiCl、縮合劑于40～50℃反應6h，反應完成后用精制溶劑精制得到Fmoc-Cys(C3H6COOEt)-OH；

所述的Fmoc-Cys-OH：4-溴丁酸乙酯摩爾比為1：3～5；

②將CTC樹脂加入DCM溶脹、洗滌，過濾后的溶脹樹脂加入縮合劑及反應溶劑，反應得到Fmoc-Cys(C3H6COOEt)-CTC樹脂，

所述CTC樹脂：Fmoc-Cys(C3H6COOEt)-OH摩爾比為1：3～5；

③將Fmoc-Cys(C3H6COOEt)-CTC樹脂用DCM進行溶脹，過濾后得到的溶脹樹脂加入脫保護液脫去Fmoc基團，并加入洗滌液洗滌以后通過固相合成連接依次與預處理活化的具有Fmoc保護的氨基酸Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH以及Boc-Tyr(Me)-OH；

所述預處理活化指分別將Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Ile-OH及Boc-Tyr(Me)-OH和縮合劑用DMF溶解，進行活化待用；

④通過一步脫除的方式，用含有TFA、冰醋酸、DCM的混合液作為脫保護液，脫去Tyr中的Boc保護基和Cys中的丁酸保護基，加入縮合劑后得到片段(Ⅱ)〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-CTC樹脂〕；

所述脫保護液為〔Boc-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys(C3H6COOEt)-CTC樹脂〕重量的30～50倍，脫保護液配比 TFA：冰醋酸：DCM體積比為1：3～5：95～97；然后加入縮合劑進行縮合反應，后過濾、洗滌液洗滌得到片段(Ⅱ)〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-CTC樹脂〕；

步驟（3）：片段Ⅲ〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-OH〕的合成：

具體步驟為：用DCM和TFA混合液作為裂解液，裂解片段(Ⅱ)中CTC樹脂，過濾后的濾液用精制溶劑精制，過濾后得到片段Ⅲ〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-OH〕；

步驟（4）：去Fmoc保護后的片段Ⅰ與片段Ⅲ縮合形成〔C4H6O-Tyr(Me)-Ile-Gln(Trt)-Asn(Trt)-Cys-Pro-Leu-Gly-NH2-Rink Amide-AM〕；最后以MTBE為溶劑，TFA裂解帶樹脂的粗品，得到粗品卡貝縮宮素。

2.根據權利要求1所述的片段方式合成卡貝縮宮素的方法，其特征在于所述的預處理活化是指分別將Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Pro-OH和縮合劑混合后用DMF溶解，進行活化待用。

3.根據權利要求1所述的片段方式合成卡貝縮宮素的方法，其特征在于所述步驟（3）裂解液為樹脂重量的30～50倍，裂解液配比為TFA：DCM體積比是5：90～100。

4.根據權利要求1所述的片段方式合成卡貝縮宮素的方法，其特征在于所述步驟（4）中的TFA用量為樹脂重量的10～15倍。