[發(fā)明專利]一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法

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• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN112094325A
• 公開（公告）日: 2020-12-18
• 發(fā)明（設計）人: 孫鵬程
• 申請（專利權）人: 湖南津安生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/34;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 長沙科明知識產權代理事務所(普通合伙) 43203
• 代理人: 彭乃恩

1.一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)用多肽固相法合成化合物1：

Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Trp(Boc)-Leu-OH；

2)用多肽液相法合成化合物2：H-Pro-Gly-NH₂；

3)在液相中合成化合物3：

Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Trp(Boc)-Leu-Pro-Gly-NH₂；

4)合成鮭魚促性腺激素釋放激素粗品：

Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Trp-Leu-Pro-Gly-NH₂。

2.根據權利要求1所述的一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于：步驟1)中，化合物1可以通過固相法從C到N末端的順序合成，其步驟包括：

1).以CTC樹脂為固相載體，Boc-Pyr-OH，F(xiàn)moc-His(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Trp(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Ser(tBu)-OH，F(xiàn)moc-Tyr(tBu)-OH，F(xiàn)moc-Gly-OH，F(xiàn)moc-Trp(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Leu-OH，為氨基酸單體；

縮合劑為HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一種；

脫帽試劑為哌嗪溶液，溶劑為偶極非質子溶劑，哌嗪溶液的質量濃度為2-5％；

從C到N末端依次合成：

Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Trp(Boc)-Leu-CTC樹脂；

2).用三氟乙酸/二氯甲烷溶液切割，濃縮后用水析出，得到化合物1：

Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Trp(Boc)-Leu-OH。

3.根據權利要求1所述的一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于：步驟2)中，化合物2可以通過液相法合成，可以通過方案1：

以Fmoc-Pro-OH，H-Gly-NH₂為氨基酸單體；

縮合劑為HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一種；

活化劑為HOSu或HOBt；

有機堿主要為DIEA或TEA；

依次合成1)Fmoc-Pro-Gly-NH₂；2)H-Pro-Gly-NH₂。

4.根據權利要求1所述的一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于：步驟3)中，化合物3可以通過液相法合成：

以化合物1和化合物2為合成片段；

縮合劑為HBTU、HATU、TATU、TBTU、PyBOP、BOP、DIC、DCC其中的一種；

活化劑為HOSu或HOBt；

有機堿主要為DIEA或TEA；

合成化合物3：

Boc-Pyr-His(Boc)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Gly-Trp(Boc)-Leu-Pro-Gly-NH₂。

5.根據權利要求4所述的一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于：化合物1和化合物2的摩爾比為1：1.01～1：1.5，化合物2和縮合劑、活化劑及有機堿的摩爾比＝1：1：1：1。

6.根據權利要求1～5任一項所述的一種多肽固液組合合成鮭魚促性腺激素釋放激素的方法，其特征在于：鮭魚促性腺激素釋放激素粗品純度可以達到90％以上，可以由化合物3溶于TFA溶液中進行反應得到，反應完成后濃縮，加入醚類試劑析出，過濾即得到鮭魚促性腺激素釋放激素粗品。