[發明專利]高產鳥苷的工程菌及其構建方法與應用有效
| 申請號： | 202011086294.6 | 申請日： | 2020-10-12 |
| 公開（公告）號： | CN112574934B | 公開（公告）日： | 2022-05-06 |
| 發明（設計）人： | 薛婷莉;胡丹;李鑫磊;吳濤 | 申請（專利權）人： | 廊坊梅花生物技術開發有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/52;C12N15/53;C12P19/40;C12R1/125;C12R1/07 |
| 代理公司： | 北京路浩知識產權代理有限公司 11002 | 代理人： | 黃爽 |
| 地址： | 065001 河北省*** | 國省代碼： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 高產 工程 及其 構建 方法 應用 | ||
1.發酵生產嘌呤核苷的方法或提高嘌呤核苷發酵產量的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)改造細菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_038462632.1或WP_014469845.1的GMP合成酶基因，使其編碼的GMP合成酶的第234位氨基酸被異亮氨酸取代，導致該酶活性增強；和/或
(2)改造細菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_013353436.1的GMP還原酶基因，使其編碼的GMP還原酶的第8位谷氨酸突變為終止密碼子，導致該酶活性減弱或失活；以及
(3)用步驟(1)和/或步驟(2)改造得到的細菌發酵生產嘌呤核苷；
其中，所述細菌為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)或解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述嘌呤核苷為鳥苷。
3.高產鳥苷的工程菌，其特征在于，所述工程菌是通過改造枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_038462632.1或WP_014469845.1的GMP合成酶基因，使其編碼的GMP合成酶的第234位氨基酸被異亮氨酸取代，導致該酶活性增強的菌株；和/或
所述工程菌是通過改造枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_013353436.1的GMP還原酶基因，使其編碼的GMP還原酶的第8位谷氨酸突變為終止密碼子，導致該酶活性減弱或失活的菌株。
4.高產鳥苷的工程菌的構建方法，其特征在于，包括：
改造枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_038462632.1或WP_014469845.1的GMP合成酶基因，使其編碼的GMP合成酶的第234位氨基酸被異亮氨酸取代，導致該酶活性增強；和/或
改造枯草芽孢桿菌或解淀粉芽孢桿菌染色體上編碼NCBI參考序列WP_013353436.1的GMP還原酶基因，使其編碼的GMP還原酶的第8位谷氨酸突變為終止密碼子，導致該酶活性減弱或失活。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，改造的方法選自誘變、定點突變、同源重組中的至少一種。
6.權利要求3所述的工程菌或按照權利要求4或5所述方法構建的工程菌在發酵生產鳥苷中的應用。
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