[發明專利]構建于大腸桿菌中的糞腸球菌群體感應基因開關系統及其表達載體、工程菌和應用

有效

• 申請號: 202011082793.8
• 申請日: 2020-10-10
• 公開（公告）號: CN112391396B
• 公開（公告）日: 2023-09-08
• 發明（設計）人: 吳俊俊;周朋;包美嬌;董明盛
• 申請（專利權）人: 南京農業大學
• 主分類號: C12N15/31
• 分類號: C12N15/31;C12N15/70;C12N15/65;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

1.一種基因工程菌，其特征在于，以大腸桿菌為宿主細胞，包含糞腸球菌（Enterococcus?faecalis）群體感應基因開關系統的表達載體；所述糞腸球菌（Enterococcus?faecalis）群體感應基因開關系統包括糞腸球菌的七肽信息素cCF10基因ccfa，負調控信息素肽基因prgx和可以感應負調控信息素肽的啟動子序列Pprgq；所述表達載體的構建步驟為將Pprgq啟動子連接到pCDFDuet-1，再連接綠色熒光蛋白基因egfp連接，得到pCDF-Pprgq-egfp；將trp和lac的雜合啟動子trc(zu)除去lacO操縱子，得到組成型啟動子trc(lost?operon)，將雙酶切的trc(lost?operon)連接到pACYCDuet-1和pETDuet-1的EcoNI和XhoI處，并在XhoI前加上NcoI?/EcoRI酶切位點，得到pACYC-trc(lost?operon)和pET-trc(lost?operon)，將雙酶切prgx和ccfa分別連接到pACYC-trc(lost?operon)和pET-trc(lost?operon)的NcoI/EcoRI處，得到A-trc(lost?operon)-prgx和E-trc(lostoperon)-ccfa。

2.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述Pprgq是強組成型啟動子，可以組成型表達啟動子下游基因。

3.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述負調控信息素肽會與組成型啟動子Pprgq結合，抑制啟動子下游基因的表達。

4.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述七肽信息素基因ccfa和負調控信息素肽基因prgx組成型轉錄翻譯合成對應的七肽信息素和負調控信息素肽，當環境中的七肽信息素積累到可以和負調控信息素肽結合的濃度后抑制負調控信息素肽對啟動子的抑制作用，逐漸啟動Pprgq下游基因的表達。

5.根據權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述表達載體將基于糞腸球菌（Enterococcus?faecalis）群體感應基因開關系統構建到表達載體上便于在微生物體內復制以及表達。

6.一種權利要求1所述的基因工程菌在實時調節發酵菌株代謝流、控制基因表達的功能中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，導入基因工程菌為發酵菌株進行發酵，開始階段不啟動靶基因的表達，當發酵液OD₆₀₀達到1時啟動靶基因的轉錄與翻譯。