[發(fā)明專利]一組焦亡執(zhí)行者融合蛋白和基于熒光素酶片段互補(bǔ)分析技術(shù)的焦亡活性檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011082184.2
• 申請(qǐng)日: 2020-10-12
• 公開（公告）號(hào): CN112210017B
• 公開（公告）日: 2022-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳君;張萍;張效威
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K19/00
• 分類號(hào): C07K19/00;C12N15/62;C12N15/85;C12Q1/02
• 代理公司: 北京高沃律師事務(wù)所 11569
• 代理人: 薛紅凡

1.一組焦亡執(zhí)行者融合蛋白，其特征在于，由hGlucN-GSDME融合蛋白和hGlucC-GSDME融合蛋白組成；

所述hGlucN-GSDME融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；

所述hGlucC-GSDME融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID No.3所示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述焦亡執(zhí)行者融合蛋白，其特征在于，所述hGlucN-GSDME融合蛋白的編碼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述hGlucC-GSDME融合蛋白的編碼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

3.一組焦亡活性報(bào)告質(zhì)粒，其特征在于，包括分別含hGlucN-GSDME融合蛋白的編碼序列和hGlucC-GSDME融合蛋白的編碼序列的真核表達(dá)載體；

所述hGlucN-GSDME融合蛋白的編碼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述hGlucC-GSDME融合蛋白的編碼序列的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示。

4.權(quán)利要求1或2所述焦亡執(zhí)行者融合蛋白或權(quán)利要求3所述焦亡活性報(bào)告質(zhì)粒在非診斷目的的GSDME介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡活性檢測(cè)中的應(yīng)用。

5.權(quán)利要求1或2所述焦亡執(zhí)行者融合蛋白或權(quán)利要求3所述焦亡活性報(bào)告質(zhì)粒在制備檢測(cè)GSDME介導(dǎo)的細(xì)胞焦亡活性的試劑或試劑盒中的應(yīng)用。

6.權(quán)利要求1或2所述焦亡執(zhí)行者融合蛋白或權(quán)利要求3所述焦亡活性報(bào)告質(zhì)粒在GSDME介導(dǎo)焦亡誘導(dǎo)劑篩選或GSDME介導(dǎo)焦亡抑制劑篩選中的應(yīng)用。

7.一種非診斷目的的基于熒光素酶片段互補(bǔ)分析技術(shù)的細(xì)胞焦亡活性檢測(cè)方法，其特征在于，包括以下步驟：

將權(quán)利要求3所述焦亡活性報(bào)告質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染到細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理后棄去上清，收集細(xì)胞依次清洗、裂解，收集細(xì)胞裂解液檢測(cè)Gaussia熒光素酶的活性，計(jì)算相對(duì)熒光素酶活性；

根據(jù)處理組與未處理組細(xì)胞的相對(duì)熒光素酶活性是否呈顯著變化，判斷細(xì)胞焦亡活性。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，所述處理包括信號(hào)通路的刺激或待篩選物質(zhì)的處理。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法，其特征在于，所述相對(duì)熒光素酶活性為單位體積的細(xì)胞裂解液中，Gaussia熒光素酶活性與總蛋白量的比值。