[發明專利]神經母細胞瘤原位模型的建立方法

在審

• 申請號: 202011082107.7
• 申請日: 2020-10-12
• 公開（公告）號: CN112980793A
• 公開（公告）日: 2021-06-18
• 發明（設計）人: 孫倩;劉建軍;任曉虎;聶露琳
• 申請（專利權）人: 深圳市疾病預防控制中心（深圳市衛生檢驗中心;深圳市預防醫學研究所）
• 主分類號: C12N5/09
• 分類號: C12N5/09;C12N5/079;A01K67/027
• 代理公司: 廣州市南鋒專利事務所有限公司 44228
• 代理人: 鄭學偉;葉利軍

本發明公開一種神經母細胞瘤原位模型的建立方法，包括S10、按1:1比例將MEM培養基和F12培養基混合制成培養基混合液，將神經母細胞瘤接種于所述培養基混合液中進行細胞培養；S20、將培養后的神經母細胞瘤進行稀釋，制成細胞懸液；S30、取用所述細胞懸液注入C57BL/6小鼠的顱骨周邊，并將所述C57BL/6小鼠進行培養，當神經母細胞瘤的體積k處于2.2cm³至3.5cm³之間時，確定得到神經母細胞瘤原位模型。本發明可以篩選出符合條件的神經母細胞瘤模型，提高了建立神經母細胞瘤模型的準確度，更便于后期研究。

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域，尤其涉及一種神經母細胞瘤原位模型的建立方法。

背景技術

神經母細胞瘤是兒童最常見的顱外腫瘤，是嬰幼兒最常見的腫瘤。有將近一半的神經母細胞瘤發生在2歲以內的嬰幼兒。神經母細胞瘤約占6-10％的兒童腫瘤，15％的兒童腫瘤死亡率。對于4歲以下兒童，每一百萬人口的死亡率為10；對于4-9歲兒童，每一百萬人口的死亡率為4例。在相關技術中，采用動物模型作為研究神經母細胞瘤最受廣大研究者的青睞，但由于動物模型中的神經母細胞瘤生長的差異，導致所建立動物模型的準確度差，不利于后期研究。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。為此，本發明的第一個目的在于提出一種神經母細胞瘤原位模型的建立方法，包括：

S10、按1:1比例將MEM培養基和F12培養基混合制成培養基混合液，將神經母細胞瘤接種于所述培養基混合液中進行細胞培養；

S20、將培養后的神經母細胞瘤進行稀釋，制成細胞懸液；

S30、取用所述細胞懸液注入C57BL/6小鼠的顱骨周邊，并將所述C57BL/6小鼠進行培養，當神經母細胞瘤的體積k處于2.2cm³至3.5cm³之間時，確定得到神經母細胞瘤原位模型。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述S10中，具體包括：

S11、采用青霉素100-200ug/ml、鏈霉素100-200ug/ml、10-15ng/mL人表皮生長因子、10-15ng/mL血管內皮生長因子兩性霉素2.5-5μg/ml、MEM培養基0.2-0.5mg/L及F12培養基0.1-0.25mg/L進行配比，以制成所述培養基混合液；

S12、將具有熒光素酶的神經母細胞瘤接種至所述培養基混合液重懸，在37℃、5％CO2的環境中培養。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述S12中，具體包括：

S121、采集患者神經母細胞瘤并通過100mL/L中性甲醛固定6～24h；

S122、通過經常規組織處理進行HE染色，在所述神經母細胞瘤中至少具有50個橙綠信號總數時，確定為所述具有熒光素酶的神經母細胞瘤；

S122、將所述具有熒光素酶的神經母細胞瘤接種至所述培養基混合液重懸，并37℃、5％CO2的環境中進行傳代培養3-4天，使其傳代至10-20代。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述S20中，具體包括：將培養后的所述神經母細胞瘤通過PBS緩沖液漂洗，并注入消化液消化成單細胞，將所述單細胞離心之后再采用所述PBS緩沖液漂洗，以制成所述細胞懸液。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述單細胞的離心條件為：800rpm離心6min。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述消化液中含有0.1％濃度的膠原酶和0.25％胰酶。

優選地，根據本發明的一個實施例，所述S30中，具體包括：