[發明專利]AOX特異性抗體組合及其制備方法和用途有效
| 申請號： | 202011079775.4 | 申請日： | 2020-10-10 |
| 公開（公告）號： | CN112142846B | 公開（公告）日： | 2022-07-08 |
| 發明（設計）人： | 王丹鳳;付愛根;王春宇 | 申請（專利權）人： | 西北大學 |
| 主分類號： | C07K16/40 | 分類號： | C07K16/40;C07K16/06;C12N15/13;C12N9/02;C12N15/53;C12N15/70;G01N33/573 |
| 代理公司： | 西安銘澤知識產權代理事務所(普通合伙) 61223 | 代理人： | 崔瑞迎 |
| 地址： | 710069 *** | 國省代碼： | 陜西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | aox 特異性 抗體 組合 及其 制備 方法 用途 | ||
1.AOX特異性抗體組合的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
S1，目的基因序列的合成，所述目的基因分別為SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4，所述目的基因SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.4對應的氨基酸序列分別如SEQ ID NO.5-SEQ ID NO.8所示；
S2，將S1合成的目的基因SEQ ID NO.1通過EcoRI和XhoI雙酶切連接構建到大腸桿菌表達載體pGEX4T.3載體上，然后通過在大腸桿菌中誘導蛋白表達，獲得AOX與GST的融合蛋白，標記為GST-AOX1a；
S3，將S2獲得的GST-AOX1a蛋白進行提純；
S4，將S3中提純的蛋白注射到兔子體內，進行4次免疫后，分離血清，獲得AOX特異性抗體AOX1a；
S5，分別合成目的基因SEQ ID NO.2-SEQ ID NO.4，然后參照S2-S4的方法制備相應的AOX特異性抗體AOX1b/c，AOX1d，AOX2。
2.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，S2中，蛋白誘導條件為：23℃，10h，0.1mMIPTG。
3.如權利要求1所述的制備方法，其特征在于，4次免疫方法如下：
初次免疫，每只兔子注射200μg蛋白；蛋白與等體積弗氏完全佐劑混合，在5mL離心管中渦旋震蕩2-3h乳化，乳化蛋白進行背部皮下多點注射，每兩周加強免疫一次，劑量為100μg，加強免疫選用弗氏不完全佐劑，最后一次免疫后，7到10天之內心臟抽血，并分離血清，獲得AOX特異性抗體。
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