[發明專利]一種提高菌株產精氨酸能力穩定性的方法

在審

• 申請號: 202011079224.8
• 申請日: 2020-10-10
• 公開（公告）號: CN114317582A
• 公開（公告）日: 2022-04-12
• 發明（設計）人: 楊晟;蔣宇;張姣;董楓
• 申請（專利權）人: 中國科學院分子植物科學卓越創新中心
• 主分類號: C12N15/77
• 分類號: C12N15/77;C12N15/66;C12N15/54;C12N15/31;C12N15/10;C12N1/21;C12P13/10;C12R1/15
• 代理公司: 上海申浩律師事務所 31280
• 代理人: 賈師英

1.一種提高菌株產精氨酸能力穩定性的方法，包括以下步驟：

以產L-精氨酸的谷氨酸棒桿菌為基礎菌株，對基因組中基因NCgl2644/cg3035進行失活或減弱。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因NCgl2644/cg3035的失活或減弱選自下述方式：敲除基因NCgl2644/cg3035開放閱讀框；使基因NCgl2644/cg3035開放閱讀框中的任何氨基酸突變為終止密碼子；使基因NCgl2644/cg3035開放閱讀框中第251位氨基酸A發生突變。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，所述基因NCgl2644/cg3035的第251位氨基酸A的突變選自下組：突變為終止密碼子TGA或者TAA；突變為氨基酸V、D、E、F、G、K、L、M、N、P、R、S、T、W或者Y。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基礎菌株是谷氨酸棒桿菌ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V))或者其衍生突變菌株，其中

所述谷氨酸棒桿菌ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V))是通過敲除谷氨酸棒桿菌ATCC13032的argR基因并引入argB的(A26V M31V)突變而得到，

所述衍生突變菌株選自專利申請CN201711430988.5中報道的菌株CCTCC NO:M2017760、專利申請CN201810493046.X中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26VM31V),NCgl0083mut2)、專利申請CN201810492999.4中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V),NCgl0742mut3)、專利申請CN201810492998.X中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V),NCgl2374mut4)、專利申請CN201810569947.2中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V),NCgl2620mut6)、專利申請CN201810569343.8中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V),NCgl2585mut51)、專利申請CN201810569948.7中報道的菌株ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V),NCgl2585mut52)。

5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述基礎菌株是谷氨酸棒桿菌ATCC13032(ΔargR,argBmut(A26V M31V))，包括以下步驟：

A.將基因組中基因NCgl2644/cg3035進行失活或減弱，獲得基因NCgl2644/cg3035突變菌株ATCC13032(cg3035mut)；

B.敲除步驟A中所述基因NCgl2644/cg3035突變菌株ATCC13032(cg3035mut)基因組中的argR基因，獲得基因敲除菌株ATCC13032((cg3035mut,ΔargR)；

C.對步驟B中所述基因敲除菌株ATCC13032(cg3035mut,ΔargR)的基因組中argB基因進行A26V和M31V突變，獲得基因工程菌株ATCC13032((cg3035mut,ΔargR,argBmut(A26VM31V))。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟A通過基因編輯技術實施，所述基因編輯采用CRISPR-Cas9系統、CRISPR-Cpf1系統、CRISPR-Cas相關的轉座系統INTEGRATE系統或者CAST系統。