[發(fā)明專利]一種多功能抗GFAP單克隆抗體的制備方法及其應用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202011076515.1
• 申請日: 2020-10-10
• 公開（公告）號: CN112175079A
• 公開（公告）日: 2021-01-05
• 發(fā)明（設計）人: 徐婭;袁文文;于倩;李晶晶;張芳;易汪雪
• 申請（專利權）人: 武漢華美生物工程有限公司
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;C12N15/85
• 代理公司: 北京眾達德權知識產(chǎn)權代理有限公司 11570
• 代理人: 梁凱

1.一種多功能抗GFAP單克隆抗體，其特征在于，其含有由SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：4所示的CDR1、由SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：5所示的CDR2以及由SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：6所示的CDR3。

2.根據(jù)權利要求1所述的多功能抗GFAP單克隆抗體，其特征在于，該抗體可以特異性識別GFAP蛋白。

3.根據(jù)權利要求1所述的多功能抗GFAP單克隆抗體，其特征在于，該抗體可以應用于抗體驗證。

4.一種制備權利要求1所述的多功能抗GFAP單克隆抗體的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，進行鼠單抗制備，首先快速將細胞凍存管從液氮罐中取出，置37℃恒溫水浴鍋內(nèi)快速搖晃至細胞融化；

S2，加入5mL的DMEM培養(yǎng)基混勻，在超凈臺操作，1200rpm離心5min，棄上清，加入20％完全培養(yǎng)基，37℃5％CO₂培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)；

S3，進行腹水制備；

S4，抗體純化；

S5，進行重組抗體制備，首先進行RNA提取，復蘇細胞，然后檢測細胞株效價，采用半皿或者1/4皿收集細胞；

S6，加1mlTrizol，吹勻至細胞完全溶解，然后加入200μl氯仿，上下劇烈顛倒，靜置2min，在12000rpm 4℃15min離心取上清；

S7，加入等體積的異丙醇，輕輕混勻，靜置10min；然后12000rpm4℃10min離心，棄上清；

S8，加1ml預冷75％乙醇，輕彈管底，12000rpm 4℃3min離心，棄上清，室溫晾干數(shù)分鐘，然后加30-50μl預冷的DEPC水至溶解即得到RNA產(chǎn)物，-80℃長期保存；

S9，進行cDNA制備，然后進行質(zhì)粒制備；

S10，抗GFAP重組抗體表達及純化，包括轉(zhuǎn)染前細胞培養(yǎng)、轉(zhuǎn)染細胞的準備、瞬時轉(zhuǎn)染和產(chǎn)物表達與檢測；

S11、進行抗體驗證。

5.根據(jù)權利要求4所述的多功能抗GFAP單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟S5-步驟S8中整個提取過程必須帶口罩與手套，防止RNase的污染。

6.根據(jù)權利要求4所述的多功能抗GFAP單克隆抗體的制備方法，其特征在于，步驟S11中抗體驗證的方法包括：WB驗證、IF驗證、FC驗證、IHC驗證。

7.一種采用權利要求1所述的多功能抗GFAP單克隆抗體的應用。