[發明專利]一種定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條及其定量檢測方法

在審

• 申請號: 202011073271.1
• 申請日: 2020-10-09
• 公開（公告）號: CN112305229A
• 公開（公告）日: 2021-02-02
• 發明（設計）人: 潘宏程;王雅茹
• 申請（專利權）人: 桂林理工大學
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/558;G01N33/543;G01N33/52
• 代理公司: 暫無信息
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1.一種定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，包括底板，所述的底板表面由左至右依次設置有樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；

所述的硝酸纖維素膜放置在底板的中部，所述的結合墊放置在硝酸纖維素膜的左端，所述的樣品墊放置在結合墊的左端，所述的吸水墊放置在硝酸纖維素膜的右端，其中，各層膜或墊之間局部重疊；

所述的硝酸纖維素膜上設有兩條背景熒光條帶，其中一條背景熒光條帶上固定有檢測線，另一條背景熒光條帶上固定有控制線，所述檢測線為抗C-反應蛋白的包被抗體，所述控制線包被有C-反應蛋白抗原，所述檢測線采用雙抗體夾心免疫模式，所述控制線采用競爭免疫模式。

2.根據權利要求1所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述結合墊按如下步驟制備：

(1)在制備的納米金溶液中，加入0.1mol/L碳酸鉀溶液，用以調節納米金溶液的pH值，然后進行步驟(2)；

(2)在步驟(1)的溶液中加入20μL待標記的濃度為1mg/mL的C-反應蛋白抗體，漩渦混勻，然后進入步驟(3)；

(3)在步驟(2)的混合溶液中，加入50μL 10％BSA溶液，4℃封閉60min，然后在4℃的條件下，12000rpm離心20min，棄去上清液，沉淀用磷酸鹽緩沖溶液復溶；

(4)將步驟(3)的復合物溶液噴涂到載體膜上，37℃條件下干燥，備用。

3.根據權利要求2所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述制備的納米金溶液的納米金顆粒直徑為20-25nm。

4.根據權利要求2所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述納米金溶液的pH值為8.0。

5.根據權利要求2所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述磷酸鹽緩沖溶液中包含1％BSA和5％蔗糖。

6.根據權利要求1所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述結合墊和樣品墊均為玻璃纖維素膜。

7.根據權利要求1所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述底板、樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊寬度均為3mm。

8.根據權利要求1所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述硝酸纖維素膜的型號為Millipore HATF00010。

9.根據權利要求1所述的用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條，其特征在于，所述背景熒光條帶是預先均勻涂布的羅丹明B熒光團。

10.一種用于定量檢測全程C-反應蛋白的免疫層析試紙條的定量檢測方法，其特征在于，具體步驟為：

用移液槍吸取待測樣品，添加至檢測C-反應蛋白的免疫層析試紙條的樣品墊上；

待測樣品發生免疫反應后，檢測背景熒光免疫層析試紙條的檢測線和控制線上的熒光信號值，分別記為T1和T2，通過相對熒光信號值對待檢測樣的濃度進行定量分析。