[發(fā)明專利]一種西葫蘆抗氧化活性成分的優(yōu)化提取方法及抗氧化活性的驗(yàn)證方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011072707.5
• 申請(qǐng)日: 2020-10-09
• 公開（公告）號(hào): CN112326567A
• 公開（公告）日: 2021-02-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 方國(guó)臻;杜京;張博;王碩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/31
• 分類號(hào): G01N21/31;G01N33/02;G01N1/40;G01N1/38;G01N1/34;G01N1/28
• 代理公司: 天津合正知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 12229
• 代理人: 張艷梅

1.一種西葫蘆抗氧化活性成分的優(yōu)化提取方法及抗氧化活性的驗(yàn)證方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)西葫蘆樣品前處理：

將新鮮的西葫蘆切成厚薄均勻的條狀后，自然干燥時(shí)間為10～24h后用粉碎機(jī)粉碎，過(guò)40～100目篩后裝入自封袋中備用；

(2)西葫蘆粗提液的制備：

準(zhǔn)確稱取經(jīng)前處理后的西葫蘆樣品各2.5g于500mL回流瓶中，按照液料比50分別加入溶劑蒸餾水、無(wú)水乙醇或甲醇，進(jìn)行水浴加熱輔助提取，提取溫度為60～80℃，提取時(shí)間為2～4h，過(guò)濾后取上清液，濾渣以同樣的方式進(jìn)行水浴提取，過(guò)濾后取上清液，將兩次上清液混合均勻后，經(jīng)真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮溫度為40～60℃，壓強(qiáng)為0.1～0.15MPa，最后用相應(yīng)的溶劑定容于100mL容量瓶中；

(3)西葫蘆活性成分含量的測(cè)定：

總多酚物質(zhì)含量的測(cè)定：以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用福林酚比色法，在堿性條件下對(duì)西葫蘆粗提液中的總多酚含量進(jìn)行測(cè)定；吸取1.0mL濾液于10mL比色管中，加入2.5mL福林酚試劑，搖勻，加入2.5mL的15％Na₂CO₃溶液，加水定容至刻度后搖勻。在40℃水浴60min，靜置冷卻20min，在778nm處測(cè)定其OD值；

總黃酮含量的測(cè)定：以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，采用分光光度法，在弱堿性條件下對(duì)西葫蘆粗提液中的總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定；吸取提取液0.2mL到10mL比色管中，加入0.4mL的三氯化鋁溶液，混勻后再加入0.4mL的醋酸鉀溶液，再次混勻后加入30％的乙醇溶液定容到刻度，混勻后靜置，在30min內(nèi)以零管調(diào)節(jié)零點(diǎn)后在415nm處測(cè)定OD值；

總?cè)坪康臏y(cè)定：以齊敦果酸為標(biāo)準(zhǔn)品，采用香草醛-冰醋酸比色法，在高氯酸環(huán)境下對(duì)西葫蘆粗提液中總?cè)坪窟M(jìn)行測(cè)定；不同溶劑提取液各1.0mL分別置于10mL的比色管中，經(jīng)氮吹儀氮吹后加入5％(m/V)香草醛-冰醋酸0.5mL，再分別加入高氯酸1mL，搖勻后在70℃水浴20min。取出后在冰水浴中冷卻，用乙醇稀釋至刻度，搖勻后靜置5min，以試劑空白為基線，在460nm下測(cè)定OD值；

抗壞血酸含量的測(cè)定：參照抗壞血酸測(cè)定試劑盒進(jìn)行測(cè)定抗壞血酸含量；

(4)抗氧化活性的比較評(píng)價(jià)：分別采用DPPH、ABTS、FRAP法對(duì)西葫蘆樣品的抗氧化活性進(jìn)行綜合對(duì)比評(píng)價(jià)；

DPPH自由基清除能力的測(cè)定：吸取0.5mL的西葫蘆粗提液，0.5mL的DPPH混合均勻，在室溫下避光反應(yīng)20min，以無(wú)水乙醇調(diào)零，以抗壞血酸代替粗提液作為陽(yáng)性對(duì)照，測(cè)定517nm處的OD值；

ABTS自由基清除能力的測(cè)定：取6個(gè)2mL的離心管，依次加入各濃度的粗提液0.5mL，再加入稀釋后的ABTS和過(guò)硫酸鉀混合液0.5mL，混合均勻后，避光放置6min，以抗壞血酸代替粗提液作為陽(yáng)性對(duì)照，在734nm處測(cè)定OD值；

FRAP還原能力測(cè)定：分別吸取濃度為25mg/mL的西葫蘆提取液和不同濃度的FeSO₄溶液各150μL，加入4.5mL的FRAP工作液，37℃下反應(yīng)10min，在593nm下測(cè)定OD值；以FeSO₄濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，將上述測(cè)得的樣品吸光度值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出相應(yīng)的FeSO₄濃度，還原力用相應(yīng)的FeSO₄濃度(μmol/L)表示。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種西葫蘆抗氧化活性成分的優(yōu)化提取方法及抗氧化活性的驗(yàn)證方法，其特征在于：步驟(1)中西葫蘆干燥時(shí)間為18h，過(guò)80目篩。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種西葫蘆抗氧化活性成分的優(yōu)化提取方法及抗氧化活性的驗(yàn)證方法，其特征在于：步驟(2)中水浴加熱回流提取的溫度為70℃，輔助提取時(shí)間3h，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮溫度為50℃，壓強(qiáng)為0.13MPa，最終的提取液濃度為25mg/mL。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種西葫蘆抗氧化活性成分的優(yōu)化提取方法及抗氧化活性的驗(yàn)證方法，其特征在于：步驟(2)中優(yōu)化的溶劑是甲醇。