[發明專利]一種菊花玻璃化組培苗復壯的方法

有效

• 申請號: 202011070910.9
• 申請日: 2020-10-09
• 公開（公告）號: CN112106659B
• 公開（公告）日: 2021-12-21
• 發明（設計）人: 黃叢林;黃昕蕾;劉華;羅昌;陳東亮;程曦;陳菲;蘇國輝;黃敦輝
• 申請（專利權）人: 北京農業生物技術研究中心
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京恒律知識產權代理有限公司 11416
• 代理人: 龐立巖

1.一種菊花玻璃化組培苗復壯的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)菊花舌狀花消毒接種，在誘導分化培養基上進行誘導培養，獲得愈傷組織，進而分化出再生植株；

(2)篩選玻璃化苗復壯培養基，將分化后形成的中度玻璃化植株轉接到所述玻璃化苗復壯培養基中，復壯培養后得到復壯組培苗；

所述玻璃化苗復壯培養基包括第一玻璃化苗復壯培養基和第二玻璃化苗復壯培養基，采用第一玻璃化苗復壯培養基培養10～20天后，再采用第二玻璃化苗復壯培養基培養10天，得到復壯組培苗；

所述第一玻璃化苗復壯培養基為：MS基本培養基+0.2mg/L 6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L瓊脂+20-40g/L蔗糖；

所述第二玻璃化苗復壯培養基為：MS基本培養基+0.2mg/L 6-BA+6g/L瓊脂+20-40g/L蔗糖；

培養容器選擇100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作為封口材料；

所述中度玻璃化植株具體表現為不大于1/3的葉片和莖上部玻璃化，呈透明腫脹；取所述中度玻璃化植株，剪成1.0-1.5cm小段后接入玻璃化苗復壯培養基中進行復壯培養。

2.根據權利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復壯的方法，其特征在于：步驟(1)中選取菊花半開放到開放時期的花蕾，用含少量洗潔精的自來水浸泡30min，之后用自來水沖洗60min，轉至超凈工作臺進行滅菌處理，具體滅菌處理方法為：先用70％乙醇處理30s，無菌水沖洗3次后用4％NaClO震蕩洗滌10min，最后用無菌水沖洗3-4次，接種時，將消毒后的花朵置于無菌培養皿中，用鑷子剝去苞片，解剖刀將總花托切去，取下花瓣，之后將分散的花瓣逐個接入固體MS培養基中，每瓶接種8-10個花瓣，進行愈傷組織的誘導培養。

3.根據權利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復壯的方法，其特征在于：步驟(2)中玻璃化苗復壯培養基的篩選過程包括如下步驟：所用到的玻璃化苗復壯培養基以不添加任何激素的MS為基本培養基，分別以6-BA、蔗糖、瓊脂、活性炭、培養容器及封口材料為試驗因素，不考慮因子間的交互作用，以5因素4水平正交試驗L(4⁵)正交表設計，其中，6-BA濃度分別設0mg/L、 0.1mg/L、 0.2mg/L、 0.5mg/L；蔗糖用量分別為20、30、40、50g/L；瓊脂用量分別為6、8、10、12g/L；活性炭用量分別為0、1、3、5g/L；不同的培養容器及封口材料設定為：200mL圓口瓶配不透氣塑料蓋、 200mL圓口瓶配透氣塑料蓋、 200mL圓口瓶配封口膜、100mL三角瓶配封口膜得到用于篩選的各處理培養基；

將分化形成的中度玻璃化組培苗進行復壯培養，具體表現為不大于1/3的葉片和莖上部玻璃化，呈透明腫脹，剪成1.0-1.5cm小段，接種到各處理培養基中，每處理8瓶，每瓶接5株，重復3次，每隔10d進行外植體的形態觀測，查看玻璃化苗恢復程度，統計恢復正常的苗數和輕度玻璃化苗數，培養30d后，統計玻璃化苗恢復率；

玻璃化苗恢復率＝(輕度玻璃化苗數+已恢復正常苗數)/接種苗數×100％；

輕度玻璃化植株表現為：上部葉片玻璃化，呈半透明水漬狀，葉色較淡，莖未發生玻璃化；恢復正常的組培苗沒有玻璃化，長勢較為健壯；

根據統計結果進行分析得到玻璃化苗復壯培養基。

4.根據權利要求3所述的菊花玻璃化組培苗復壯的方法，其特征在于：繼代培養2～3次后進行復壯培養。

5.根據權利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復壯的方法，其特征在于：所述菊花為甘菊或長裂太行菊。