[發(fā)明專利]一種菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011070910.9
• 申請(qǐng)日: 2020-10-09
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112106659B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-12-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃叢林;黃昕蕾;劉華;羅昌;陳東亮;程曦;陳菲;蘇國(guó)輝;黃敦輝
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京農(nóng)業(yè)生物技術(shù)研究中心
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京恒律知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11416
• 代理人: 龐立巖

1.一種菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)菊花舌狀花消毒接種，在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，獲得愈傷組織，進(jìn)而分化出再生植株；

(2)篩選玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基，將分化后形成的中度玻璃化植株轉(zhuǎn)接到所述玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基中，復(fù)壯培養(yǎng)后得到復(fù)壯組培苗；

所述玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基包括第一玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基和第二玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基，采用第一玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基培養(yǎng)10～20天后，再采用第二玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基培養(yǎng)10天，得到復(fù)壯組培苗；

所述第一玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L 6-BA+1-5g/L活性炭+6g/L瓊脂+20-40g/L蔗糖；

所述第二玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基為：MS基本培養(yǎng)基+0.2mg/L 6-BA+6g/L瓊脂+20-40g/L蔗糖；

培養(yǎng)容器選擇100mL的玻璃三角瓶，以封口膜作為封口材料；

所述中度玻璃化植株具體表現(xiàn)為不大于1/3的葉片和莖上部玻璃化，呈透明腫脹；取所述中度玻璃化植株，剪成1.0-1.5cm小段后接入玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基中進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法，其特征在于：步驟(1)中選取菊花半開(kāi)放到開(kāi)放時(shí)期的花蕾，用含少量洗潔精的自來(lái)水浸泡30min，之后用自來(lái)水沖洗60min，轉(zhuǎn)至超凈工作臺(tái)進(jìn)行滅菌處理，具體滅菌處理方法為：先用70％乙醇處理30s，無(wú)菌水沖洗3次后用4％NaClO震蕩洗滌10min，最后用無(wú)菌水沖洗3-4次，接種時(shí)，將消毒后的花朵置于無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用鑷子剝?nèi)グ馄实秾⒖偦ㄍ星腥ィ∠禄ò辏髮⒎稚⒌幕ò曛饌€(gè)接入固體MS培養(yǎng)基中，每瓶接種8-10個(gè)花瓣，進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法，其特征在于：步驟(2)中玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基的篩選過(guò)程包括如下步驟：所用到的玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基以不添加任何激素的MS為基本培養(yǎng)基，分別以6-BA、蔗糖、瓊脂、活性炭、培養(yǎng)容器及封口材料為試驗(yàn)因素，不考慮因子間的交互作用，以5因素4水平正交試驗(yàn)L(4⁵)正交表設(shè)計(jì)，其中，6-BA濃度分別設(shè)0mg/L、 0.1mg/L、 0.2mg/L、 0.5mg/L；蔗糖用量分別為20、30、40、50g/L；瓊脂用量分別為6、8、10、12g/L；活性炭用量分別為0、1、3、5g/L；不同的培養(yǎng)容器及封口材料設(shè)定為：200mL圓口瓶配不透氣塑料蓋、 200mL圓口瓶配透氣塑料蓋、 200mL圓口瓶配封口膜、100mL三角瓶配封口膜得到用于篩選的各處理培養(yǎng)基；

將分化形成的中度玻璃化組培苗進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)，具體表現(xiàn)為不大于1/3的葉片和莖上部玻璃化，呈透明腫脹，剪成1.0-1.5cm小段，接種到各處理培養(yǎng)基中，每處理8瓶，每瓶接5株，重復(fù)3次，每隔10d進(jìn)行外植體的形態(tài)觀測(cè)，查看玻璃化苗恢復(fù)程度，統(tǒng)計(jì)恢復(fù)正常的苗數(shù)和輕度玻璃化苗數(shù)，培養(yǎng)30d后，統(tǒng)計(jì)玻璃化苗恢復(fù)率；

玻璃化苗恢復(fù)率＝(輕度玻璃化苗數(shù)+已恢復(fù)正常苗數(shù))/接種苗數(shù)×100％；

輕度玻璃化植株表現(xiàn)為：上部葉片玻璃化，呈半透明水漬狀，葉色較淡，莖未發(fā)生玻璃化；恢復(fù)正常的組培苗沒(méi)有玻璃化，長(zhǎng)勢(shì)較為健壯；

根據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果進(jìn)行分析得到玻璃化苗復(fù)壯培養(yǎng)基。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法，其特征在于：繼代培養(yǎng)2～3次后進(jìn)行復(fù)壯培養(yǎng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菊花玻璃化組培苗復(fù)壯的方法，其特征在于：所述菊花為甘菊或長(zhǎng)裂太行菊。