[發明專利]一種評價轉基因外源蛋白對蠐螬影響的生物檢測方法

有效

• 申請號: 202011069964.3
• 申請日: 2020-09-30
• 公開（公告）號: CN112335609B
• 公開（公告）日: 2022-07-29
• 發明（設計）人: 方志翔;劉標;沈文靜;張莉;劉來盤;劉國強
• 申請（專利權）人: 生態環境部南京環境科學研究所
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033;A23K50/90;A23K20/147;A23K10/37
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 王艷

1.一種評價轉基因外源蛋白對蠐螬影響的生物檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）配制轉基因外源蛋白稀釋液；

2）將玉米芯粉碎研磨成粒徑小于100微米的顆粒，用純凈水洗凈，高溫高壓滅菌得到玉米芯粉末備用；

3）將步驟2）處理好的玉米芯粉末加入步驟1）得到的蛋白稀釋液中，在離心管中充分震蕩混勻，靜置，離心，取出上清液；

4）將上清液重新加入步驟3）中的離心管，重復步驟3）多次；

5）最后離心得到的沉淀即為吸附好蛋白的玉米芯粉，取出備用；

6）上清液用于蛋白含量測定，以確定蛋白實際吸附量；

7）取蠐螬置于底部鋪滿土壤的小燒杯中，土壤為滅菌農田土或人造土壤，厚度2-5cm，飼喂吸附好蛋白的玉米芯粉、空白玉米芯粉以及辛硫磷乳油浸泡后的玉米芯粉組，置于培養箱中飼養，觀察蠐螬存活情況與體重變化情況評價轉基因外源蛋白對蠐螬的影響；

所述步驟1）中的轉基因外源蛋白為Cry2Ab蛋白，所述步驟1）中的轉基因外源蛋白的濃度為0 .1~1mg/ml，所述步驟3）中的玉米芯粉末與蛋白稀釋液的固液比為1：5~1:20g/mL，所述步驟3）中的離心轉速為800-1500rpm，離心時間為2-5min，所述步驟7）中的培養箱中的培養條件為22-25℃，60-80%RH，光照12L :12D 。