[發明專利]一種基于構建雙功能酶合成PAPS的方法有效
| 申請號： | 202011069389.7 | 申請日： | 2020-09-30 |
| 公開（公告）號： | CN113046402B | 公開（公告）日： | 2023-04-28 |
| 發明（設計）人： | 康振;王陽;胥睿睿;堵國成;陳堅 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12P19/32 | 分類號： | C12P19/32;C12N9/12 |
| 代理公司： | 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211 | 代理人： | 林娟 |
| 地址： | 214000 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基于 構建 功能 合成 paps 方法 | ||
【權利要求書】：
1.一種合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸的方法，其特征在于，以ATP為底物，利用PAPS合成雙功能酶合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸；所述PAPS合成雙功能酶是由ATP硫酸化酶和APS激酶通過融合接頭序列連接而成的ATP硫酸化酶和APS激酶的融合蛋白；所述融合接頭序列如SEQ?ID?NO.1～5任一所示；所述ATP硫酸化酶來源于釀酒酵母；所述APS激酶來源于大腸桿菌。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述融合接頭序列重復多次，重復次數小于6次。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述ATP硫酸化酶第215位～218位的P環上氨基酸序列HRAH突變為HNGH或HAGH。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，催化合成3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸的催化體系中緩沖液為10～50mM?Tris-HCl，pH為6.0～8.0，添加2～20mM?ATP、1～5mM硫酸鎂，0.5～1.0mg/mL?PAPS合成雙功能酶。
5.根據權利要求4所述的方法，其特征在于，催化體系添加保護劑甘油、BSA、DTT中的一種或多種。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述催化反應溫度為20～40℃，催化時間為24～72h。
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