[發(fā)明專利]一種基于構(gòu)建ATP再生系統(tǒng)高效催化合成PAPS的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011069179.8
• 申請(qǐng)日: 2020-09-30
• 公開（公告）號(hào): CN113046403B
• 公開（公告）日: 2023-04-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 康振;堵國(guó)成;王陽(yáng);胥睿睿;陳堅(jiān)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12P19/40
• 分類號(hào): C12P19/40
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

1.一種合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的方法，其特征在于，以ATP為底物，以APS激酶和ATP硫酸化酶為催化劑，并在反應(yīng)中加入聚磷酸激酶合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸；所述聚磷酸激酶來源于谷氨酸棒桿菌或結(jié)核分枝桿菌，Gene?ID分別為1020661和888760；所述APS激酶的GenBank號(hào)為M74586.1；所述ATP硫酸化酶的Gene?ID為853466。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，通過linker將APS激酶和ATP硫酸化酶連接得到PAPS合成雙功能酶。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述linker的序列如SEQ?ID?NO.1所示。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，反應(yīng)體系中還含有硫酸鹽。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，在反應(yīng)體系中加入底物ATP和硫酸鎂，再加入PAPS合成雙功能酶，或同時(shí)加入APS激酶和ATP硫酸化酶，催化反應(yīng)開始后的0-24h添加聚磷酸激酶進(jìn)行反應(yīng)；所述PAPS合成雙功能酶是通過SEQ?ID?NO.1所示的linker將APS激酶和ATP硫酸化酶連接得到的。

6.一種提高3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸轉(zhuǎn)化效率的方法，其特征在于，在以ATP為底物的反應(yīng)體系中加入聚磷酸激酶和磷酸供體；所述磷酸供體包括三聚磷酸、四聚磷酸和/或六聚磷酸；所述反應(yīng)體系中含有APS激酶和ATP硫酸化酶；所述APS激酶的GenBank號(hào)為M74586.1；所述ATP硫酸化酶的Gene?ID為853466；所述聚磷酸激酶來源于谷氨酸棒桿菌或結(jié)核分枝桿菌，Gene?ID分別為1020661和888760。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，反應(yīng)體系中還含有硫酸鹽作為硫酸根供體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，在反應(yīng)體系中加入底物ATP和硫酸鎂，再加入PAPS合成雙功能酶，或同時(shí)加入APS激酶和ATP硫酸化酶，催化反應(yīng)開始后24h內(nèi)添加聚磷酸激酶進(jìn)行反應(yīng)；所述PAPS合成雙功能酶是通過SEQ?ID?NO.1所示的linker將APS激酶和ATP硫酸化酶連接得到的。

9.一種提高ADP回收效率和速率的方法，其特征在于，在合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的反應(yīng)中加入聚磷酸激酶，同時(shí)再加入磷酸供體；所述ADP是以ATP為底物合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的副產(chǎn)物；所述合成3’-磷酸腺苷-5’-磷酰硫酸的反應(yīng)是以ATP為底物，以APS激酶和ATP硫酸化酶為催化劑；所述聚磷酸激酶來源于谷氨酸棒桿菌或結(jié)核分枝桿菌，Gene?ID分別為1020661和888760；所述APS激酶的GenBank號(hào)為M74586.1；所述ATP硫酸化酶的Gene?ID為853466。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，其特征在于，所述磷酸供體包括但不限于焦磷酸、三聚磷酸、四聚磷酸和/或六聚磷酸。