[發(fā)明專利]一種基于高通量測(cè)序檢測(cè)膽管癌FGFR1/2/3融合基因的文庫(kù)構(gòu)建方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202011069119.6
• 申請(qǐng)日: 2020-09-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN112144125B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-06-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳志宏;修陽(yáng)斌;陳琰;康燦昆
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廈門(mén)飛朔生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C40B50/06
• 分類號(hào): C40B50/06;C40B40/06;C12Q1/6806;C12Q1/6858;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京科億知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11350
• 代理人: 李興林

1.一種基于高通量測(cè)序檢測(cè)膽管癌FGFR1/2/3融合基因的文庫(kù)構(gòu)建方法，其特征在于，該文庫(kù)構(gòu)建方法使用的引物及探針序列如SEQ ID NO.1-67所示；

所述文庫(kù)構(gòu)建方法，包括以下步驟：

(1)使用引物及探針序列SEQ ID NO.1-67對(duì)待測(cè)樣本進(jìn)行多重PCR擴(kuò)增獲得文庫(kù)；

(2)文庫(kù)的純化。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于高通量測(cè)序檢測(cè)膽管癌FGFR1/2/3融合基因的文庫(kù)構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟(1)中樣本為手術(shù)切除的新鮮病理組織、甲醛固定石蠟包埋病例組織、石蠟切片中的一種。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于高通量測(cè)序檢測(cè)膽管癌FGFR1/2/3融合基因的文庫(kù)構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟(1)中PCR擴(kuò)增程序如下表所示

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于高通量測(cè)序檢測(cè)膽管癌FGFR1/2/3融合基因的文庫(kù)構(gòu)建方法，其特征在于，所述步驟(1)中PCR擴(kuò)增反應(yīng)體系如下表所示

序號(hào)	物料	物料濃度	用量(μL)
1	RingCapbuffer	10×	2.5
2	2]]>	25mM	4
3	dNTPs	5μM	2
4	FGFR富集反應(yīng)引物MIX	50μM	4
5	2O]]>	純化水	6.4
6	RingCap-Taq酶	5U/ul	0.5
7	Ion-BCXX-F	50μM	0.2
8	Ion-BCXX-R	50μM	0.2
9	C-Primer	50μM	0.2
10	cDNA	-	5
	總體積		25

。